Elementy enzymologii i biochemii białek

Urszula Guzik, Danuta Wojcieszyńska

Получить доступ

Купить эту книгу

ISBN/ISSN:

978-83-8012-446-2

DOI:

Издательство:

Uniwersytet Śląski

Год публикации:

2015

Количество страниц:

XML:ISBN/ISSN:

ONIX MARC21

Bibliografia:

Guzik, Urszula; Wojcieszyńska, Danuta. Elementy enzymologii i biochemii białek. Red. . Katowice: Uniwersytet Śląski, 2015, 78 s. ISBN 978-83-8012-446-2

Bibliografia refWorks:

RT Book, Whole

SR Electronic(1)

A1 Guzik, U.

A1 Wojcieszyńska, D.

T1 Elementy enzymologii i biochemii białek

PB Uniwersytet Śląski

PP Katowice

YR 2015

SN 978-83-8012-446-2

Bibliografia BibTex:

@Book{ 142607, author = "Guzik, Urszula and Wojcieszyńska, Danuta", editor = "", title = "Elementy enzymologii i biochemii białek", publisher = "Uniwersytet Śląski", year = "2015", address = "Katowice", isbn = "978-83-8012-446-2" }

Bibliografia endNote:

TY - BOOK

AU - Guzik, Urszula

AU - Wojcieszyńska, Danuta

ED -

TI - Elementy enzymologii i biochemii białek

PB - Uniwersytet Śląski

CY - Katowice

PY - 2015

SN - 978-83-8012-446-2

ER -

Библиографическое описание Интернет-ресурсов (standard APA):

Guzik, Urszula; Wojcieszyńska, Danuta. Elementy enzymologii i biochemii białek [база данных онлайн] Katowice: Uniwersytet Śląski, 2015 [доступ: 19 05 2024]. Доступ в Ibuk Libra: https://libra.ibuk.pl/reader/elementy-enzymologii-i-biochemii-bialek-urszula-guzik-danuta-142607.

Kinetyka reakcji enzymatycznych, Elektroforeza, immobilizacja, dioksygenazy

Prezentowany skrypt jest przeznaczony dla studentów biologii, biotechnologii i innych kierunków pokrewnych, którym z założenia ma ułatwić przygotowanie do ćwiczeń, zaznajomienie się z podstawowymi metodami stosowanymi w enzymologii oraz wykonanie ...

более

ISBN/ISSN:

978-83-8012-446-2

DOI:

Издательство:

Uniwersytet Śląski

Год публикации:

2015

Количество страниц:

XML:ISBN/ISSN:

ONIX MARC21

Przedmowa /9
Wykaz stosowanych oznaczeń /11
Zasady bezpieczeństwa i higieny pracy obowiązujące w Pracowni biochemii białek /13
1.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej /15
1.1.1. WPROWADZENIE /15
1. Izolacja i oczyszczanie enzymu /15
1.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /18
1.1.3. WYKONANIE /19
1.1.3.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej szczepu Stenotrophomonas maltophilia KB2 /19
1.1.3.2. Oznaczanie aktywności 1,2-dioksygenazy katecholowej /21
1.1.3.3. Oznaczanie stężenia białka metodą Bradforda /22
1.1.3.3.1. Przygotowanie krzywej wzorcowej /22
1.1.3.3.2. Oznaczenie stężenia białka w badanym materiale biologicznym /23
1.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /23
1.2. Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek metodą sączenia żelowego oraz oczyszczanie białek metodą chromatografii jonowymiennej /24
1.2.1. WPROWADZENIE /24
1.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /25
1.2.3. WYKONANIE /26
1.2.3.1. Wyznaczenie masy cząsteczkowej 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą sączenia żelowego /26
1.2.3.2. Oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą chromatografii jonowymiennej /28
1.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /29
1.3. Elektroforeza dwuwymiarowa 2-DE białek /30
1.3.1. WPROWADZENIE /30
1.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /32
1.3.3. WYKONANIE /32
1.3.3.1. Przygotowanie surowej frakcji enzymatycznej do elektroforezy 2-DE /32
1.3.3.2. Przygotowanie krzywej wzorcowej do oznaczania stężenia białka metodą Bradforda w obecności buforu do przygotowywania próbek 2-DE /33
1.3.3.3. Rehydratacja pask�w IPG /34
1.3.3.4. Izoogniskowanie białek z zastosowaniem pasków IPG /34
1.3.3.5. Przygotowanie pasków do drugiego kierunku SDS-PAGE i rozdział elektroforetyczny /35
1.3.3.6. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue /36
1.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /36
1.4. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących /36
1.4.1. WPROWADZENIE /36
1.4.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /38
1.4.3. WYKONANIE /38
1.4.3.1. Przygotowanie żelu poliakrylamidowego i rozdział białek /38
1.4.3.2. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue oraz metodą srebrową /39
1.4.4. OPRACOWANIE I DOKUMNETACJA WYNIK�W /40
1.5. Literatura /40
2. Kinetyka reakcji enzymatycznej katalizowanej przez 1,2-dioksygenazę katecholową /43
2.1. Wyznaczanie optymalnych warunk�w reakcji enzymatycznej /43
2.1.1. WPROWADZENIE /43
2.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /44
2.1.3. WYKONANIE /45
2.1.3.1. Badanie wpływu temperatury na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /45
2.1.3.2. Badanie wpływu pH na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /46
2.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /47
2.2. Wyznaczanie stałych kinetycznych reakcji enzymatycznej /48
2.2.1. WPROWADZENIE /48
2.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /51
2.2.3. WYKONANIE /52
2.2.3.1. Badanie wpływu stężenia substratu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /52
2.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /53
2.3. Inhibicja reakcji enzymatycznych /54
2.3.1. WPROWADZENIE /54
2.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /55
2.3.3. WYKONANIE /56
2.3.3.1. Badanie wpływu 2,4-dichlorofenolu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /56
2.3.3.2. Badanie wpływu jonów niklu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /57
2.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /58
2.4. Literatura /59
3. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej /61
3.1. Wpływ immobilizacji na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej /61
3.1.1. WPROWADZENIE /61
3.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /62
3.1.3. WYKONANIE /63
3.1.3.1. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej /63
3.1.3.2. Oznaczanie stężenia białka w kulkach alginianowych /63
3.1.3.2.1. Wyznaczenie krzywej kalibracyjnej dla oznaczania stężenia białka metodą Bradfordaw obecności KOH /63
3.1.3.3. Oznaczanie aktywności immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej /64
KOH /64
3.1.3.4. Wpływ czasu przechowywania na aktywność wolnego i immobilizowanego enzymu /65
3.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /66
3.2. Badanie właściwości immobilizowanego enzymu /67
3.2.1. WPROWADZENIE /67
3.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI /68
3.2.3. WYKONANIE /69
3.2.3.1. Badanie wpływu pH na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej /69
3.2.3.2. Badanie wpływu temperatury na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej /70
3.2.3.3. Badanie wpływu jonów metali oraz związków fenolowych na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej /71
3.2.3.4. Oznaczanie stężenia białka w surowej frakcji enzymatycznej i w kulkach alginianowych /72
3.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIK�W /73
3.3. Literatura /74