Biofizyka

Zofia Jóźwiak, Grzegorz Bartosz

Uzyskaj dostęp

Zakup książkę

ISBN/ISSN:

978-83-01-14461-6

DOI:

Wydawnictwo:

Wydawnictwo Naukowe PWN

Rok wydania:

2012

Liczba stron:

556

XML:ISBN/ISSN:

ONIX MARC21

Bibliografia:

. Biofizyka. Red. Jóźwiak, Zofia; Bartosz, Grzegorz . Warszawa: Wydawnictwo Naukowe PWN, 2012, 556 s. ISBN 978-83-01-14461-6

Bibliografia refWorks:

RT Book, Whole

SR Electronic(1)

A2 Jóźwiak, Z.

A2 Bartosz, G.

T1 Biofizyka

PB Wydawnictwo Naukowe PWN

PP Warszawa

YR 2012

SN 978-83-01-14461-6

Bibliografia BibTex:

@Book{ 84, author = "", editor = "Jóźwiak, Zofia and Bartosz, Grzegorz", title = "Biofizyka", publisher = "Wydawnictwo Naukowe PWN", year = "2012", address = "Warszawa", isbn = "978-83-01-14461-6" }

Bibliografia endNote:

TY - BOOK

AU -

ED - Jóźwiak, Zofia

ED - Bartosz, Grzegorz

TI - Biofizyka

PB - Wydawnictwo Naukowe PWN

CY - Warszawa

PY - 2012

SN - 978-83-01-14461-6

ER -

Netografia (standard APA):

. Red. Jóźwiak, Zofia; Bartosz, Grzegorz. Biofizyka [baza danych online] Warszawa: Wydawnictwo Naukowe PWN, 2012 [dostęp: 28 04 2024]. Dostęp w Ibuk Libra: https://libra.ibuk.pl/reader/biofizyka-zofia-jozwiak-grzegorz-84.

biologia, fizyka, biofizyka

Jedyny, uniwersalny podręcznik obejmujący podstawy biofizyki, a także metody stosowane w badaniach układów biologicznych.

Książka zawiera podstawowy kurs biofizyki oraz omówienie i zastosowania: - spektrofluorymetrii, - spektrofotometrii...

Więcej

ISBN/ISSN:

978-83-01-14461-6

DOI:

Wydawnictwo:

Wydawnictwo Naukowe PWN

Rok wydania:

2012

Liczba stron:

556

XML:ISBN/ISSN:

ONIX MARC21

1. Statystyczna ocena wyników pomiarów15
1.1. Wprowadzenie. Pojęcie pomiaru (B. Rychlik)15
1.1.1. Jednostki miar układu SI15
1.1.1.1. Jednostki podstawowe16
1.1.1.2. Jednostki pochodne16
1.1.2. Dziesiętne wielokrotności i podwielokrotności jednostek miar18
1.1.3. Jednostki miar spoza układu SI18
1.2. Analiza błędow pomiarowych20
1.2.1. Rodzaje i źrodła błędow pomiarowych20
1.2.2. Określanie niepewności pomiarowej20
1.2.2.1. Określanie niepewności pomiarowej wielkości mierzonej bezpośrednio21
1.2.2.2. Określanie niepewności pomiarowej przy pomiarach pośrednich21
1.3. Współzależność cech; korelacja i regresja liniowa (B. Rychlik)22
1.4. Zmienna losowa, rozkłady zmiennej losowej (B. Rychlik)24
1.5. Kryteria oceny metod analitycznych (M. Puchała)25
1.6. Ćwiczenia. Rozkłady zmiennych losowych: Gaussa i Poissona (B. Rychlik)28
Literatura29
2.1. Gęstość ciał stałych i cieczy (M. Soszyński)30
2. Ćwiczenia wprowadzające do biofizyki30
2.1.1. Wyznaczanie gęstości ciał stałych i cieczy za pomocą wagi hydrostatycznej32
2.1.2. Wyznaczanie gęstości względnej cieczy za pomocą piknometru34
2.1.3. Wyznaczanie gęstości cieczy za pomocą areometru35
2.1.4. Wyznaczanie gęstości płynów biologicznych metodą pomiaru prędkości opadania kropli35
2.2. Elementy akustyki i ruch falowy (M. Soszyński)37
2.2.1. Wyznaczanie prędkości rozchodzenia się dźwięku w ciele stałym za pomocą rury Kundta41
2.2.2. Wyznaczanie częstości drgań widełek stroikowych metodą Quinckego41
2.3. Wilgotność względna i bezwzględna powietrza (M. Soszyński)42
Zasada działania psychrometru43
2.4. Kalorymetria (M. Soszyński)45
2.4.1. Wyznaczanie ciepła topnienia lodu46
2.4.2. Wyznaczanie współczynnika rozszerzalności objętościowej cieczy za pomocą piknometru48
2.4.3. Wyznaczanie ilości ciepła wydzielanego z organizmu człowieka przy oddychaniu49
2.5. Zjawisko termoelektryczne. Wyznaczanie temperatury za pomocą termopary (M. Soszyński)50
2.6. Pomiar oporu elektrycznego i siły elektromotorycznej (M. Soszyński)53
2.6.1. Pomiar oporu elektrycznego przewodnika w układzie mostka Wheatstone'a53
2.6.2. Pomiar siły elektromotorycznej (SEM) ogniwa metodą kompensacji55
2.7. Oscyloskop katodowy (M. Soszyński)57
2.8. Warstwa monomolekularna (M. Koter-Michalak)60
Literatura62
3.1. Podstawowe pojęcia termodynamiki klasycznej (M. Bryszewska)63
3.1.1. Pojęcie układu, parametry układu, stan układu63
3. Termodynamika63
3.1.2. Pierwsza zasada termodynamiki; funkcje stanu64
3.1.3. Druga zasada termodynamiki; procesy odwracalne i nieodwracalne. Entropia, entalpia swobodna65
3.1.4. Entalpia swobodna reakcji chemicznych67
3.1.5. Zadania rachunkowe z termodynamiki (M. Przybylska)70
3.2. Ćwiczenia79
3.2.1. Entalpia swobodna reakcji dysocjacji p-nitrofenolu (M. Koter-Michalak)79
3.2.2. Entalpia swobodna oddziaływania ligandu z błoną komórkową.Wykres Scatcharda (A. Marczak)80
3.2.3. Wyznaczanie E0' układu oksyhemoglobina/methemoglobina (A. Marczak)83
3.2.4. Wyznaczanie współczynnika odbicia (A. Marczak)86
3.2.5. Wyznaczanie mechanicznego współczynnika filtracji (M. Koter-Michalak)88
Literatura90
4.1. Podstawy spektroskopii UV-Vis (K. Gwoździński, A. Koceva-Chyła)91
4.1.1. Charakterystyka promieniowania elektromagnetycznego i jego oddziaływania z materią91
4. Spektrofotometria91
4.1.2. Wiązania chemiczne w cząsteczkach93
4.1.3. Przejścia elektronowe w cząsteczkach96
4.1.4. Wpływ polarności rozpuszczalnika na widma UV103
4.1.5. Prawa absorpcji promieniowania elektromagnetycznego i ich zastosowanie105
4.1.6. Odchylenia od prawa Bouguera–Lamberta–Beera109
4.1.7. Zastosowanie spektrofotometrii UV-Vi112
4.2. Budowa i ogolna zasada działania spektrofotometrow UV-Vis (K. Gwoździński, A. Koceva-Chyła)114
4.2.1. Podział spektrofotometrów118
4.2.2. Parametry charakteryzujące spektrofotometry119
4.3. Ćwiczenia120
4.3.1. Prawo Bouguera–Lamberta–Beera. Wyznaczanie współczynników absorpcji (M. Puchała, A. Krokosz)120
4.3.2. Spektrofotometryczne oznaczanie stężenia związku w mieszaninie dwuskładnikowej. Prawo addytywności absorpcji (M. Puchała, A. Krokosz)121
4.3.3. Widma absorpcyjne rożnych form hemoglobiny. Spektrofotometr dwuwiązkowy w zakresie UV-Vis (M. Puchała, A. Krokosz)123
4.3.4. Kinetyka reakcji utleniania hemoglobiny. Aktywność katalazy (M. Puchała, A. Krokosz)128
4.3.5. Wpływ rożnych czynnikow na widma w zakresie UV-Vis (K. Gwoździński)130
Literatura131
5.1. Ogólna charakterystyka znaczników fluorescencyjnych (M. Bryszewska)132
5. Zastosowanie znaczników fluorescencyjnych w badaniach błon biologicznych132
5.1.1. Przykłady najważniejszych znaczników fluorescencyjnych133
5.1.2. Procesy fizyczne zachodzące w cząsteczce znacznika po pochłonięciu przez nią fotonu135
5.1.2.1. Absorpcja i fluorescencja135
5.1.2.2. Polaryzacja fluorescencji136
5.1.2.3. Gaszenie fluorescencji139
5.1.3. Aparatura i pomiar fluorescencji znaczników140
5.2. Badanie fizycznej struktury błon biologicznych za pomocą znaczników fluorescencyjnych (M. Bryszewska)141
5.2.1. Oddziaływanie znaczników z błonami141
5.2.2. Lokalizacja znaczników w błonach142
5.2.3. Badanie ładunku powierzchniowego błon143
5.2.4. Badanie ruchów cząsteczek w błonach144
5.2.4.1. Badanie dyfuzji rotacyjnej w błonach144
5.2.4.2. Badanie dyfuzji lateralnej w błonach146
5.2.5. Badanie oddziaływań białkowo-lipidowych w błonach148
5.2.6. Wyniki wybranych badań zmian błon komórkowych w stanach patologicznych przy użyciu znaczników fluorescencyjnych150
5.3. Ćwiczenia151
5.3.1. Ogolna budowa i zasada działania spektrofluorymetru (M. Puchała)151
5.3.2. Charakterystyka spektralna związkow fluoryzujących w zakresie UV-Vis (M. Puchała)152
5.3.3. Fluorymetryczne oznaczanie zawartości tryptofanu w białkach (M. Przybylska, M. Puchała)155
5.3.4. Analiza dyfuzji lateralnej pirenu w błonach komórkowych krwinek czerwonych (M. Przybylska)157
5.3.5. Badanie wpływu wybranych związkow chemicznych na mikrolepkość błony komórkowej erytrocytów metodą pomiaru współczynnika anizotropii fluorescencji TMA-DPH (M. Przybylska)158
5.3.6. Oznaczanie potencjału błonowego krwinek czerwonych metodą fluorymetryczną (M. Przybylska)161
5.3.7. Badanie szybkości transportu doksorubicyny przez błony komórkowe erytrocytow (M. Przybylska)164
1-anilinonaftaleno-8-sulfonianu z błoną komorkową krwinek czerwonych (M. Przybylska)166
5.3.8. Wyznaczanie parametru wiązania znacznika fluorescencyjnego166
5.3.9. Wyznaczanie szybkości akumulacji daunorubicyny w błonach komórkowych fibroblastow metodą transferu energii (M. Przybylska)169
Literatura171
6. Spektrometria elektronowego rezonansu paramagnetycznego (EPR)173
6.1. Podstawy spektroskopii EPR (K. Gwoździński, M. Koter-Michalak)174
6.2. Rodniki nitroksylowe w metodzie znakowania spinowego (K. Gwoździński)178
6.3. Metoda pułapkowania spinowego (K. Gwoździński)186
6.4. Widma znaczników spinowych przyłączonych do lipidow i białek (K. Gwoździński, M. Koter-Michalak)188
6.5. Budowa spektrometrow EPR (K. Gwoździński)195
6.6. Ćwiczenia197
6.6.1. Dobór niektórych parametrów związanych z rejestracją widm EPR (K. Gwoździński)197
6.6.2. Wyznaczanie podstawowych parametrow widma EPR (K. Gwoździński)198
6.6.3. Wpływ polarności oraz lepkości rozpuszczalnikow na widmo EPR (K. Gwoździński)199
6.6.4. Badanie szybkości redukcji związków znakowanych spinowo w erytrocytach (K. Gwoździński)200
6.6.5. Wyznaczanie energii aktywacji procesu redukcji nitroksydu we wnętrzu erytrocytow (K. Gwoździński)201
6.6.6. Badania zmian konformacyjnych białek błonowych przy użyciu znacznika maleimidowego (K. Gwoździński)203
6.6.7. Denaturacja termiczna znakowanej spinowo albuminy (K. Gwoździński, G. Bartosz)204
6.6.8. Wyznaczanie parametru widmowego Tempo dla sztucznych błon fosfolipidowych (M. Koter-Michalak)205
6.6.9. Badanie wpływu etanolu na stopień uporządkowania lipidów błony erytrocytarnej (M. Koter-Michalak)206
6.6.10. Wyznaczanie mikrolepkości wnętrza erytrocytu (M. Koter-Michalak)207
6.6.11. Badanie wolnych rodnikow w materiale biologicznym (M. Koter-Michalak)208
Literatura209
7.1. Turbidymetria i nefelometria (A. Koceva-Chyła)210
7.1.1. Podstawy teoretyczne210
7. Inne metody spektroskopowe210
7.1.2. Ćwiczenia214
7.1.2.1. Turbidymetryczne oznaczenie stężenia komórek (A. Koceva-Chyła)214
7.1.2.2. Wyznaczanie przebiegu hemolizy krwinek na podstawie pomiaru zmian turbidancji (A. Koceva-Chyła)215
7.2. Polarymetria (A. Koceva-Chyła, M. Puchała)216
7.2.1. Podstawy teoretyczne216
7.2.1.1. Światło niespolaryzowane216
7.2.1.2. Polaryzacja światła, światło spolaryzowane217
7.2.1.3. Sposoby polaryzacji światła219
7.2.1.4. Polaryzatory i analizatory światła222
7.2.1.5. Skręcenie płaszczyzny polaryzacji przez substancje optycznie czynne225
7.2.1.6. Dichroizm kołowy (M. Puchała, A. Krokosz)227
7.2.1.7. Dyspersja skręcalności optycznej i dichroizm kołowy (M. Puchała, A. Krokosz)228
7.2.1.8. Skręcalność właściwa229
7.2.1.10. Polarymetry — rodzaje i budowa230
7.2.1.9. Oznaczanie kąta skręcenia płaszczyzny polaryzacji230
7.2.1.11. Zasada pomiaru kąta skręcenia płaszczyzny polaryzacji w polarymetrze kołowym231
7.2.2. Budowa i zasada działania polarymetru automatycznego POLAMAT A (A. Krokosz)233
7.2.3. Ćwiczenia235
7.2.3.1. Polarymetryczne oznaczenie stężenia i skręcalności właściwej sacharozy (A. Koceva-Chyła)235
7.2.3.2. Aktywność optyczna aminokwasow i białek (M. Puchała, A. Krokosz)236
7.3. Refraktometria (A. Koceva-Chyła)237
7.3.1. Podstawy teoretyczne237
7.3.1.1. Zjawiska odbicia i załamania światła w ośrodkach izotropowych237
7.3.1.2. Zjawisko całkowitego wewnętrznego odbicia, kąt graniczny240
7.3.1.3. Czynniki wpływające na wartość współczynnika załamania światła241
7.3.1.4. Refrakcja molowa, refrakcja właściwa i egzaltacja243
7.3.1.5. Zastosowanie pomiaru kąta granicznego w refraktometrii245
7.3.1.6. Refraktometry — budowa i zasada działania245
7.3.2. Ćwiczenia247
7.3.2.1. Wyznaczenie zależności pomiędzy stężeniem a współczynnikiem załamania światła roztworów alkoholu etylowego i alkoholu metylowego (A. Koceva-Chyła)247
7.3.2.2. Wyznaczenie stężenia białka w osoczu krwi metodą refraktometryczną (A. Koceva-Chyła)249
Literatura250
8.1. Potencjometria (A. Fortuniak)251
8.1.1. Elektrody251
8. Potencjometria i konduktometria251
8.1.1.1. Elektroda wodorowa252
8.1.1.2. Elektrody pierwszego rodzaju252
8.1.1.3. Elektrody drugiego rodzaju253
8.1.1.4. Elektrody trzeciego rodzaju254
8.1.1.5. Elektrody redok254
8.1.1.6. Elektrody tlenkowe255
8.1.1.7. Elektrody jonoselektywne255
8.1.1.7.1. Elektrody membranowe krystaliczne256
8.1.2. Zastosowanie pomiarów potencjometrycznych257
8.1.2.1. Pomiar pH257
8.1.1.7.2. Elektrody membranowe heterogenne257
8.1.1.7.3. Elektrody membranowe z ciekłym wymieniaczem257
8.1.1.7.4. Elektrody enzymatyczne257
8.1.2.2. Miareczkowanie potencjometryczne258
8.1.2.2.1. Miareczkowanie metodą klasyczną258
8.1.2.2.2. Miareczkowanie do punktu zerowego259
8.1.2.2.3. Miareczkowanie metodą rożnicową259
8.1.3. Zastosowanie pomiarów potencjometrycznych do wyznaczania stałych fizykochemicznych260
8.1.2.2.4. Miareczkowanie z dwumetalicznym układem elektrod260
8.2. Konduktometria (A. Fortuniak)261
8.2.1. Zastosowanie pomiarów konduktometrycznych262
8.2.1.1. Miareczkowanie konduktometryczne262
8.2.1.2. Miareczkowanie alkacymetryczne263
8.2.2. Konduktometria bezpośrednia264
8.2.1.3. Miareczkowanie strąceniowe264
8.2.3. Zastosowanie pomiarów konduktometrycznych265
8.2.3.1. Wyznaczanie stałej dysocjacji265
8.2.3.2. Wyznaczanie iloczynu rozpuszczalności265
8.3. Ćwiczenia266
8.3.1. Jonowe właściwości aminokwasow pH-metryczne wyznaczanie pK glicyny (A. Marczak)266
8.3.2. Miareczkowanie kwasu ortofosforowego pH-metrycznie i wobec wskaźników pH (A. Marczak)269
8.3.2.1. Miareczkowanie wobec wskaźników270
8.3.3. Wyznaczanie przewodności elektrycznej erytroplazmy (M. Koter-Michalak)271
8.3.2.2. Miareczkowanie pH-metryczne271
Literatura272
9.1. Lepkość biopolimerow (K. Gwoździński)273
9.1.1. Lepkość, wiadomości ogolne273
9. Wiskozymetria273
9.1.2. Makrocząsteczka podczas przepływu276
9.1.3. Pomiary lepkości280
9.2. Ćwiczenia283
9.2.1. Wyznaczanie współczynnika lepkości metodą Stokesa (M. Soszyński)283
9.2.2. Pomiar lepkości względnej cieczy przy użyciu wiskozymetru kapilarnego (M. Soszyński)284
9.2.3. Zastosowanie pomiarów lepkości do wyznaczania masy cząsteczkowej polimeru (K. Gwoździński)285
Literatura287
10.1. Wirowki (M. Puchała)288
10. Wirowanie288
10.2. Ultrawirowki (K. Gwoździński)292
10.3. Określanie mas cząsteczkowych metodą szybkości sedymentacji (K. Gwoździński)294
10.4. Wyznaczanie mas cząsteczkowych metodą rownowagi sedymentacyjnej (K. Gwoździński)299
10.5. Sedymentacja w gradiencie gęstości (K. Gwoździński)302
10.6. Równowaga sedymentacyjna w ustalonym gradiencie (K. Gwoździński)306
10.7. Ćwiczenia308
10.7.1. Wirowanie — ćwiczenie wstępne (A. Krokosz)308
10.7.2. Termiczna denaturacja białka (M. Puchała)309
10.7.3. Rozdział lipoprotein osocza metodą ultrawirowania (K. Gwoździński)310
10.7.4. Rozdział mieszaniny kwasów rybonukleinowych metodą wirowania w gradiencie gęstości sacharozy (K. Gwoździński)312
10.7.5. Oznaczanie pojedynczych pęknięć w DNA metodą ultrawirowania w gradiencie sacharozy alkalicznej (B. Rózga)314
10.7.6. Oznaczanie superhelikalności nukleoidu DNA metodą ultrawirowania w gradiencie sacharozy neutralnej (B. Rózga)319
Literatura323
11.1. Ogólne zasady (G. Zaleśna)324
11. Elektroforeza324
11.1.1. Próbka325
11.1.2. Bufory325
11.1.3. Elektroendoosmoza326
11.1.4. Zastosowanie metody326
11.2. Ćwiczenia327
11.2.1. Rozdział białek surowicy krwi człowieka na acetylocelulozie (W. Duda, G. Zaleśna)327
11.2.2. Rozdział białek surowicy ludzkiej metodą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym (G. Zaleśna)328
11.2.3. Oznaczanie masy cząsteczkowej białek metodą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z SDS (wg Weber i Osborn, 1969) (G. Zaleśna)330
11.2.4. Oznaczanie punktu izoelektrycznego białek metodą ogniskowania izoelektrycznego (G. Zaleśna)332
Literatura334
12.1. Podstawy teoretyczne, zastosowanie metody (K. Gwoździński)335
12. Chromatografia335
12.1.1. Chromatografia adsorpcyjna (K. Gwoździński)336
12.1.1.1. Izotermy adsorpcji338
12.1.1.2. Czynniki wpływające na rozdział chromatograficzny340
12.1.1.3. Monitorowanie rozdziału w chromatografii kolumnowej342
12.1.2. Chromatografia podziałowa (K. Gwoździński)344
12.1.3. Chromatografia bibułowa (K. Gwoździński)344
12.1.3.1. Identyfikacja chromatogramow345
12.1.3.2. Zależność między wspołczynnikiem Rf a budową substancji346
12.1.4. Chromatografia cienkowarstwowa (K. Gwoździński)347
12.1.5. Filtracja żelowa (K. Gwoździński)348
12.1.5.1. Złoża stosowane w chromatografii żelowej349
12.1.5.2. Wspołczynniki podziału w chromatografii żelowej350
12.1.5.3. Charakterystyka pasm i parametry kolumny chromatograficznej351
12.1.5.4. Oznaczanie mas cząsteczkowych metodą chromatografii żelowej354
12.1.6. Chromatografia jonowymienna (K. Gwoździński)355
12.1.6.1. Rodzaje wymieniaczy jonowych355
12.1.6.2. Parametry charakteryzujące wymieniacze jonowe356
12.1.6.3. Bufory stosowane w chromatografii jonowymiennej357
12.1.7. Wysokosprawna chromatografia cieczowa (K. Gwoździński)359
12.1.6.4. Zastosowania chromatografii jonowymiennej359
12.1.8. Chromatografia gazowa363
12.2. Ćwiczenia367
12.2.1. Zastosowanie metody filtracji żelowej do oznaczania masy cząsteczkowej białka (K. Gwoździński)367
12.2.2. Oznaczanie stężenia adduktu MDA-TBA metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej HPLC (K. Gwoździński)370
12.2.3. Rozdział barwnikow roślinnych za pomocą kolumnowej chromatografii adsorpcyjnej (K. Gwoździński)371
12.2.4. Rozdział substancji z wykorzystaniem chromatografii cienkowarstwowej (K. Gwoździński)372
Literatura373
13.1. Ogólne informacje o białkach (Z. Szweda-Lewandowska)374
13. Biofizyka białek374
13.2. Właściwości funkcjonalne i fizykochemiczne hemoglobiny375
13.3. Ćwiczenia378
13.3.1. Otrzymywanie i oznaczanie stężenia hemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska)378
13.3.2. Oznaczanie krzywej dysocjacji tlenowej hemoglobiny metodą spektrofotometryczną (Z. Szweda-Lewandowska)379
13.3.3. Efekt Bohra (Z. Szweda-Lewandowska)381
13.3.4. Oznaczenie granicznej liczby lepkościowej [_] roztworów hemoglobiny natywnej i zdenaturowanej (Z. Szweda-Lewandowska)382
13.3.5. Badanie stabilności methemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska)385
13.3.5.1. Otrzymywanie methemoglobiny (Z. Szweda-Lewandowska)385
13.3.5.2. Oznaczanie stabilności MetHb w środowisku kwaśnym oraz w obecności mocznika i chlorowodorku guanidyny (Z. Szweda-Lewandowska)386
13.3.5.3. Oznaczenie szybkości denaturacji MetHb w moczniku i chlorowodorku guanidyny (Z. Szweda-Lewandowska)386
13.3.5.4. Wyznaczanie energii aktywacji dla procesu denaturacji MetHb w środowisku kwaśnym (Z. Szweda-Lewandowska)387
13.3.5.5. Wyznaczanie pK methemoglobiny (D. Pałecz)388
13.4. Charakterystyka dysmutazy ponadtlenkowej (G. Zaleśna)391
13.4.1. Izolowanie dysmutazy ponadtlenkowej z wątroby wieprzowej391
13.4.2. Charakterystyka białka enzymatycznego392
13.4.2.1. Oznaczanie białka393
13.4.2.2. Metoda barwienia żeli na aktywność dysmutazy ponadtlenkowej393
Literatura394
13.4.2.3. Metoda pirogallolowa oznaczania aktywności dysmutazy ponadtlenkowej394
14.1. Błony biologiczne (M. Bryszewska)395
14. Biofizyka błon395
14.1.1. Skład lipidowy błon396
14.1.2. Asymetria lipidow błonowych398
14.1.3. Oddziaływania międzycząsteczkowe398
14.1.4. Płynność błony399
14.1.5. Ruchy cząsteczkowe w dwuwarstwie lipidowej400
14.1.6. Białka błonowe402
14.1.7. Transport przez błony404
14.2. Ćwiczenia405
14.2.1. Wyznaczanie współczynnika przenikania (D. Pałecz)405
14.2.2. Oporność osmotyczna erytrocytów (D. Pałecz)407
14.2.3. Energia aktywacji procesu hemolizy (D. Pałecz)411
14.2.3.1. Turbidymetryczny pomiar energii aktywacji procesu hemolizy412
14.2.3.2. Absorpcjometryczny pomiar energii aktywacji procesu hemolizy412
14.2.4. Izolowanie błon erytrocytarnych i charakterystyka chemiczna otrzymanego preparatu (A. Marczak)413
14.2.4.1. Izolowanie błon erytrocytarnych413
14.2.4.2. Ekstrakcja lipidow z błon erytrocytarnych (Vaskovsky i wsp., 1975)414
14.2.4.3. Charakterystyka chemiczna otrzymanych błon erytrocytarnych415
14.2.4.3.1. Oznaczanie zawartości białka416
14.2.4.3.2. Oznaczenie zawartości hemoglobiny416
14.2.4.3.3. Identyfikacja i oznaczanie ilościowe fosfolipidow błon erytrocytarnych416
14.2.5. Otrzymywanie liposomów z lecytyny jaja kurzego i badanie ich przepuszczalności dla chromianu (D. Pałecz)417
14.2.4.4. Opracowanie wyników417
14.2.4.3.4. Oznaczanie zawartości cholesterolu417
14.2.6. Wyznaczanie szybkości transportu 2,4-dinitrofenyloglutationu z erytrocytów człowieka (M. Soszyński)419
Literatura422
15.1. Powstawanie wolnych rodników (M. Gwoździński)423
15. Wolne rodniki, antyutleniacze oraz uszkodzenia lipidów, białek i kwasów nukleinowych423
15.2. Reakcje wolnych rodników (M. Gwoździński)426
15.3. Wolne rodniki w biologii i medycynie (M. Gwoździński)428
15.3.1. Powstawanie wolnych rodników in vivo428
15.3.2. Udział czynników zewnętrznych w generowaniu aktywnych form tlenu432
15.4. Komórkowe i tkankowe systemy ochronne przeciw aktywnym formom tlenu (M. Gwoździński)437
15.5. Wolne rodniki w patologii (M. Gwoździński)444
15.5.1. Utlenianie i modyfikacja lipidów444
15.5.2. Utlenianie i modyfikacja białek447
15.5.3. Utlenianie kwasów nukleinowych451
15.6. Ćwiczenia452
15.6.1. Oznaczanie stężenia zredukowanego glutationu w erytrocytach poddanych działaniu H2O2 (A. Marczak, K. Rękawiecka)452
15.6.2. Oznaczanie rodników hydroksylowych HO• w układach biologicznych (Z. Szweda-Lewandowska)454
15.6.2.1. Analiza degradacji deoksyrybozy przez układy generujące rodniki HO•454
15.6.2.2. Oznaczanie stałych szybkości reakcji rodnikow HO•456
15.6.3. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej płynów biogennych (G. Batrosz)457
15.6.3.1. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie hamowania utleniania ABTS458
15.6.3.2. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie hamowania utleniania 2',7'-dichlorofluorescyny460
15.6.3.3. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie redukcji jonów żelazowych460
15.6.3.4. Oznaczanie całkowitej zdolności antyoksydacyjnej na zasadzie redukcji kationorodnika ABTS +461
15.6.4. Pułapkowanie spinowe (K. Gwoździński)463
15.6.4.1. Pułapkowanie rodnika HO• przy użyciu DMPO463
15.6.4.2. Pułapkowanie rodnika O2 –• przy użyciu DMPO464
15.6.4.3. Pułapkowanie rodników O2 –• i HO• w pobudzonych neutrofilach465
15.6.4.4. Pułapkowanie rodnika HO• przy użyciu PBN466
Literatura467
16.1. Apoptoza — wprowadzenie468
16. Metody stosowane w badaniach apoptozy w komórkach (Z. Jóźwiak)468
16.1.1. Rola białka p53469
16.1.2. Rodzina białek Bcl-2469
16.1.3. Struktura i funkcja kaspaz471
16.1.4. Mechanizmy indukcji apoptozy472
16.2. Ćwiczenia474
16.2.1. Oznaczanie zmian apoptotycznych w komórkach za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego474
16.2.2. Oznaczanie potencjału błony mitochondrialnej476
16.2.3. Oznaczanie reaktywnych form tlenu w hodowlach komórkowych479
16.2.4. Oznaczanie wewnątrzkomorkowego stężenia wapnia w fibroblastach483
16.2.5. Oznaczanie aktywności kaspazy 3 w komórkach apoptotycznych484
16.2.6. Oznaczanie uszkodzeń DNA metodą kometową487
16.2.7. Oznaczanie fragmentacji DNA w żelu agarozowym489
Literatura492
17.1. Wprowadzenie494
17. Cytometria przepływowa (J. Skierski)494
17.2. Ćwiczenia501
17.2.1. Utrwalanie komórek w alkoholu etylowym501
17.2.2. Oznaczanie zawartości kwasów nukleinowych DNA i RNA przy użyciu barwienia oranżem akrydyny502
17.2.3. Oznaczanie indeksu mitotycznego przy użyciu metody kwaśnej denaturacji DNA i barwienia oranżem akrydyny506
17.2.4. Oznaczanie odsetka komórek żywych i martwych przy użyciu dioctanu fluoresceiny i jodku propidyny509
17.2.5. Oznaczanie odsetka komórek apoptotycznych przy użyciu barwienia aneksyną V i jodkiem propidyny512
17.2.6. Oznaczanie zawartości DNA i białek cytoplazmatycznych w komórkach po zabarwieniu DAPI i sulforodaminą515
17.2.7. Wyznaczanie odsetka subpopulacji limfocytów przy użyciu zestawu przeciwciał monoklonalnych simultest firmy Becton-Dickinson520
Literatura525
18.1. Generowanie promieniowania laserowego (J. Kujawa)526
18. Zastosowanie laserów w biologii i medycynie526
18.2. Oddziaływanie promieniowania laserowego z tkanką biologiczną (J. Kujawa)530
18.3. Ćwiczenia533
18.3.1. Określanie stopnia hemolizy krwinek czerwonych poddawanych naświetlaniu promieniowaniem laserowym po inkubacji z ftalocyjaninami (E. Krajewska, D. Pałecz)533
18.3.2. Pomiar aktywności acetylocholinoesterazy erytrocytarnej poddanej działaniu promieniowania laserowego (M. Sadowska)535
Literatura537
Tablice539
Indeks551