Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
34
SekcjaB–Podstawyelektrofizjologii
melanogastergrupaaminokwasównakońcuNłańcucha
polipeptydowegoblokujewewnętrznyotwórkanału.Ussakówza
bloktenodpowiadaoddzielnapodjednostkaB,połączonazkońcem
Nłańcucha.
TematypokrewneNapięciowozależnekanały
jonowe(B3)
Napięciowozależnekanały
wapniowe(C6)
Patchclamping
Patchclampingjesttechnikąumożliwiającąbadaniewłaściwościelektrofi-
zjologicznychpojedynczychkanałówjonowych.Polegaonanawytwo-
rzeniu,pomiędzyszklanąmikropipetąapowierzchniąbłonykomórko-
wej,złączaobardzodużejopornościelektrycznej.Rejestrowanesątylko
teprądy,któreprzepływająprzezminiaturowyfragmentbłony(ang.
patch—łatkę),którymieścisiępodmikroelektrodą.Technikataumożli-
wiapomiarbardzomałychprądów,któreprzepływająprzezpojedyncze
kanałyjonowe(ok.1pA).Układelektronicznyurządzeniarejestrującego
pozwalanazastosowaniemetodystabilizacjinapięcia(voltageclamp)do
badanegofragmentubłony(rys.1a).
Pomiaryzużyciemtechnikipatchclampingmożnaprzeprowadzać
wkilkuukładach(rys.1b),zktórychkażdyznajdujezastosowaniewod-
miennegotypudoświadczeniach:
1.Połączeniezkomórką(ang.cell-attachedmode).Stosowanedopo-
miarówpojedynczychkanałówwkomórkachnieuszkodzonych.Słu-
żydobadaniaefektówoddziaływanianakanałyjonowe,układów
wtórnychprzekaźników,którepobudzasięzapomocązwiązków,
np.neuroprzekaźników,podawanychdopłynuinkubacyjnego.
2.Rejestracjazcałejkomórki(ang.whole-cellmode).Wtejodmianie
rozrywasięfragmentbłonykomórkowej,znajdującysiępodmikro-
elektrodą.Prądrejestrowanyprzezmikroelektrodęreprezentujesu-
męwszystkichprądówprzepływającychwdanychwarunkachpo-
przezcałąbłonękomórki.Rejestrujesięwięcprądymakroskopowe.
3.Metoda„zewnątrz–nazewnątrz”(ang.outside-outmode).Jestto
jednazodmianmetody,wktórejodrywasięfragmentbłony(łatkę)
odresztykomórki.Fragmenttenpozostajenadalwścisłym,wysoko-
oporowympołączeniuzmikroelektrodą.Konfiguracjatakapozwala
nabadaniewpływunakanałyjonowe,takichligandówjakneuro-
przekaźniki,hormonyczyzwiązkifarmakologiczneoddziałującena
komórkęodzewnątrz.Ligandytepodajesiędopłynuinkubacyjnego,
ponieważmożeonbyćzmienianyowieleszybciejniżpłynznaj-
dującysięwewnątrzmikroelektrody.Zaletątejmetodyjestmożli-
wośćprzeprowadzaniatakskomplikowanychdoświadczeń,jakusta-
laniezwiązkumiędzydawkąpodawanejsubstancjiareakcją
komórki.
4.Metoda„wewnątrz–nazewnątrz”(ang.inside-outmode).Jestdo
drugaodmianametody,wktórejbadasięizolowanyfragmentbłony.
Zazwyczajstosowanadoszczegółowegobadaniaukładówwtórnych
przekaźników,któremogąbyćpodawanebezpośrednionawe-
wnętrznąpowierzchniębłonywpłynieinkubacyjnym.
