Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
B4–Biologiamolekularnakanałówsodowychipotasowych
(a)
Rs=GW
mikroelektroda
szklana
V
ref
prądowo-napięciowy
wzmacniacz
V
out
(b)
połączenie
zkomórką
-nazewnątrz"
„zewnątrz-
komórka
cała
-nazewnątrz"
„wewnątrz-
zamknięty
(c)
otwarty
1pA
100ms
Rys.1.Technikapatchclamping.(a)Schematobwoduelektrycznego.NapięcieVrefsłużydostabilizacji
(równoważenia)potencjałubłonyneuronu.Metodapoleganawytworzeniuwysokooporowegopołączenia
(Rs)pomiędzyczubkiemmikroelektrodyrejestrującejabłonąkomórkową.(b)Konfiguracjetechnikipatch
clamping.(c)PrądyprzepływającepoprzezpojedynczyreceptorGABAA
35
Przykładwynikudoświadczalnego,jakimożnauzyskaćzapomocą
technikipatchclamping,ilustrujerysunek1c.Każdezpokazanychupro-
stokątnych”wychyleńzarejestrowanejliniiprądowejjestefektemotwar-
ciapojedynczegokanałubłonowego.Wysokośćwychyleniastanowi
miaręprąduwjednymkanale,ajegodługość—miaręczasuotwarcia
kanału.Analizastatystycznadużejliczbytakichprzebiegówumożliwia
określenietakichparametrówjakśredniczasotwarciaizweryfikowanie
teoretycznychmodelikinetykikanałujonowego.Badaniatakiesąbardzo
użytecznewokreślaniumechanizmówdziałaniazwiązkówneuroaktyw-
nychnapoziomiemolekularnym.Metodapatchclampingokazałasięrów-
nieżnieocenionawbadaniachefektówinżynieriigenetycznejsklonowa-
nychkanałówireceptorówbłonowych.
Budowa
napięciowo-
zależnych
kanałów
sodowych
KlonowanieisekwencjonowanieDNAumożliwiaokreśleniesekwencji
aminokwasowejkodowanegobiałka.Pozwalatonawyciągnięciewnio-
skówobudowiedrugorzędowejbiałka,jaknp.obecnościokolicostru-
kturzea-helisyalbostrukturzeB.Analizarozmieszczeniaaminokwasów
hydrofobowychihydrofilnychwłańcuchupolipeptydowymwskazuje,
którefragmentymogąbyćzlokalizowanewewnątrzbłonykomórkowej.
