Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
4.Przygotowaniemateriałubiologicznegodoanalizy
cychprzyczynąpatofizjologii.Dooczyszczaniaizagęszczaniaużywasięcoraz
nowszychzłóż,omożliwienajwiększympowinowactwiedokonkretnegobiałka,
m.in.dziękizastosowaniunanotechnologii.
Naszczególnąuwagęzasługujenowoczesnametodapozyskiwaniakomórek
zfragmentówtkanek–laserowepozyskiwaniemikroskrawków(LCM,ang.laser
capturemicrodissection).Charakterystycznącechąmetody(rys.4.9)jesttermopla-
stycznabłonaumieszczonanadlubpodpreparatem.Powstępnymwybraniupod
mikroskopem,następujewycięciezaprogramowanegofragmentutkankiiHwy-
strzelenie”gonapowierzchniębłony.Dziękizastosowaniulaseramożliwajest
precyzyjnaizolacjabardzomałejilościtkanki,comaszczególneznaczeniewba-
daniachnp.guzównowotworowych,określaniumarginesuzdrowejtkankilub
zmianmiażdżycowych.
Inną,powszechniestosowanąmetodąekstrakcjibiałekzkomórekitkanekjest
tzw.prasafrancuska,którejdziałanieopierasięnagwałtownychzmianach(bar-
dzowysokiegoiniskiego)ciśnienia,indukującychlizękomórek.
35
Zagadnienia
1.Wjakimceluwewstępnymprzygotowaniupróbkistosujesięnastępujące
substancje.Podajwzorytychzwiązkóworazzastanówsięnadmechanizmem
ichdziałania(przedstawodpowiedniereakcje):
-jodoacetamid
-CHAPS
-DTT
-TLCK
2.Jakichzwiązkównależyużyćwcelu:
-specyficznegotrawieniabiałkaprzyresztachlizynyiargininy?
-denaturacjibiałkapozbawionegomostkówsiarczkowych?
-denaturacjibiałkapozbawionegooddziaływańhydrofobowych?
3.Opiszschematyczniemodelpostępowaniawceluizolacjiibadańnastępują-
cychzwiązków:silniezasolonebiałko,histonH2A.X,glukoamylaza.
Literatura
Bodzoń-KułakowskaA.etal.Methodsforsamplepreparationinproteomicresearch.J.Chromatogr.B
849(2007)1–31.
BoosK.S.,FleischerK.T.Multidimensionalon-linesolidphaseextraction(SPE)usingrestrictedaccess
materials(RAM)withmolecularimprintedpolymers(MIP).FreseniusJ.Anal.Chem.371(2001)
16–20.
CanasB.etal.Trendsinsamplepreparationforclassicalandsecondgenerationproteomics.J.Chroma-
togr.A1153(2007)235–258.
Emmert-Bucketal.Lasercapturemicrodissection.Science274(5289)(1996)998–1001.
HinshawJ.Solid-PhaseMicroextractionLC*GCDecember2003.
PawliszynJ.SamplingandSamplePreparationforFieldandLaboratory.ElsevierSci.2002.
