Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
[1]orazSchneidera[2][P25,s.43–45;
rychzbudowanezwiązkiwielkocząs-
P43,s.272–274],zilustrowanynarys.
teczkowe.Suchamasatejpierwszejfrak-
1.7pozwalaocenićudziałskładników
cjistanowijedynieod2do5%całości
chemicznychwbudowiekomórki.Umoż-
suchejmasyhomogenatu,czylibardzo
liwiaonszybką„inwentaryzację”związ-
niewiele.Pozwalatoprzypuszczać,że
wglaważnychbiologicznieprzez
komórkasyntetyzujebezprzerwyprekur-
analizęzawartychwnichresztfosforo-
sorydużychmolekuł.
wych.Tegorodzajupostępowanieod-
Drugafrakcjazawierazwiązkiroz-
bywasięwczterechetapachidostarcza
puszczalnenagorącowmieszaninieeta-
czterechfrakcji,którymiwkolejności
noluieteru,awięclipidy,reprezentujące
otrzymywania:1)frakcjakwasorozpusz-
10–20%całościsuchejmasyhomogenatu.
czalna,tzn.wodnyroztwórsolimineral-
Trzeciafrakcjatocząsteczkiroz-
nychiorganicznychzwiązkówmałocząs-
puszczalnenagorącow5%TCAlub
teczkowychrozpuszczalnychnazimno
PCA,awrzeczywistościwynikhydrolizy
wśrodowiskukwaśnym,czyliwlodowa-
idepolimeryzacjikwasównukleinowych.
tym5%kwasietrichlorooctowym(ang.
Reprezentujeona10–20%suchejmasy
trichloroaceticacid;skrótTCA)lub
homogenatu.Wpewnychkomórkach,
nadchlorowym(ang.perchloricacid;
bogatychwcukrowce,trudnouniknąć
skrótPCA),oraztrzyfrakcjenieroz-
zanieczyszczeniaskładnikamitegotypu
puszczalnewtychwarunkach,czyli
frakcjikwasównukleinowych[P25,s.
związkówkwasonierozpuszczalnych,tj.
45].Wartododać,żezgodniezmetodą
2)lipidów,3)kwasównukleinowychi
SchmidtaiThannhausera[1]możnaod-
4)białek.Zgodniezeschematem,frak-
dzielićRNAodDNAiwiększościbiałek
cjonowanietakiestanowiserięrozpusz-
wwynikuhydrolizywroztworzeKOH
czaniaznastępczymrozdzieleniemwwy-
(0,1mol/l,37°C,15godz.)odwodnionego
nikuwirowaniaskładnikówrozpuszczal-
iodlipidowanegoosadukwasonierozpusz-
nychinierozpuszczalnych.Wtympo-
czalnego.WtychwarunkachRNAulega
stępowaniu
nie
stosuje
się
żadnych
depolimeryzacjidonukleotydówipo
środkówostrożności(pozaniskątem-
odwirowaniuznajdujesięwsupernatan-
peraturąprzyotrzymywaniupierwszej
cie,aDNApozostajespolimeryzowany.
frakcji);
homogenat
zawiera
jedynie
Zakwaszeniezasadowegohydrolizaturoz-
szczątkistrukturkomórkowych.
tworemPCAlubTCApozwalawydzielić
Pierwszafrakcja,tzw.kwasorozpusz-
osadzawierającyDNAibiałka[P43,
czalna,jestbardzoniejednorodna:zgro-
s.270].Pozostały,chemicznieniejedno-
madzonewniejcząsteczki,którełączy
rodny,osadstanowifrakcjęczwartą
tylkojednawłaściwośćrozpuszczal-
całościsuchejmasy,astrukturamolekuł,
nośćnazimnowśrodowiskukwaśnym.
którezawieraczylibiałekjest
tonieorganiczneiorganiczneskładniki
silniezmieniona(zdenaturowana)wwy-
małocząsteczkowe:solemineralne,wtym
nikudrastycznychzabiegówstosowanych
orto-,meta-ipirofosforany,aminokwasy
wpoprzedzającychetapach.Nauwagę
ikrótkiepeptydy,nukleotydyożnym
zasługujeilośćtegoosadu,corównież
stopniuufosforylowania,czylimono-,di-
dowodzi,żebiałkagłównymtworzy-
itrifosfonukleozydy,cukryniespolime-
wemkomórki.
ryzowane,najczęściejestrycukrowo-fos-
Spośdkomórkowychwielkocząste-
forowe(heksozo-itriozofosforowe),apo-
czekodlatszczególniedużouwagi
nadtom.in.fosfopirogronian,acetylofos-
koncentrująnasobiedwatypylinio-
foran.Temałecząsteczkiorganiczne
wychbiopolimerów:kwasynukleinowe,
tworzązapewnepulęprekursorów,zktó-
któreprzechowująiprzekazująinforma-
18