Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
Wektorypochodnebakulowirusów
Dokomórekbezkręgowcówtransgenywprowadzasięwykorzystującwektorybędącepo-
chodnymiwirusówinfekującychtakiekomórki,tj.bakulowirusów.Sątowirusyokoli-
stym,dwuniciowymDNA(dsDNA,ang.double-strandedDNA),zdolnedoinfekcjiróż-
nychgatunkówowadów.Opróczelementówtypowychdlakażdegowektora,tj.sekwen-
cjiori,genukodującegomarkerselekcyjny(np.genuopornościnaantybiotyk)orazre-
gionupolilinkerowego,czylisyntetycznegoregionuDNA,wobrębiektóregoznajdują
sięunikatowemiejscarozpoznawaneprzezróżneenzymyrestrykcyjne,wektorybakulo-
wirusowezawierająrównieżkasetęekspresyjną,wktórejwystępująsekwencjeregulacyj-
ne(promotoriterminator)genupolihedrynybakulowirusa,głównegobiałkapóźnej
fazyinfekcjiwirusowej.Transgenjestwprowadzanydowektorawobszarpolilinkera,
znajdującegosiętużzaregulacyjnąsekwencjąpromotorowąpolihedryny.Następniezli-
nearyzowanywektorniosącytransgenzostajewprowadzonydokomórekowadzichlub
larwmetodątransfekcji,wrazzmieszaninąDNAbakulowirusa.Wewnątrzkomórkido-
chodzidorekombinacjihomologicznejmiędzywektoremaDNAbakulowirusa,pro-
wadzącejdopowstaniazrekombinowanegowirusa,wktórymgenpolihedrynyzastąpio-
nyzostałtransgenem.Wektorypochodnebakulowirusówznajdujązastosowaniem.in.
wprodukcjiodczynnikówanalitycznych,diagnostycznychiniektórychleków.
DNAmożebyćwprowadzonydokomórekpochodzeniazwierzęcegotakżeza
pomocąwektorówpochodnychpapiliomy(HPV,czynnikaetiologicznegobrodawcza-
ków),stosowanychm.in.wterapiirakaszyjkimacicy,lubteżzapomocąpochodnych
wirusaSV40lubwirusakrowianki,używanychdoklonowaniagenówwkomórkach
ssaczych.
Podobnie,docelówgenetycznejmodyfikacjiroślin,skonstruowanowektorywyko-
rzystującwirusyinfekującerośliny(np.wirusmozaikikalafiora).
Wektoryekspresyjne
Wektoryekspresyjnecharakteryzująsięobecnościąsekwencjiregulatorowych,m.in.
silnychpromotorów.Obecnośćtakiegopromotora,zaktórymbezpośredniowklono-
wanyjesttransgen,powoduje,żesyntezabiałkakodowanegoprzeztenpromotorza-
chodzinawysokimpoziomieijestściśleregulowana.Najczęściejfunkcjętakąpełnią
promotorygenówpóźnychbiałekfagowych,np.promotorpóźnychbiałekfagaT7.Pro-
motortenjestrozpoznawanyprzezspecyficznąpolimerazęRNA,którejgenzostał
uprzedniowprowadzonydochromosomubakteriiwmiejscezapromotoremlaktozo-
wym.SyntezafagowejpolimerazyRNAzachodzi,gdydopożywkijestdodanalaktoza
lubinnyzwiązek,np.IPTG(izopropylotiogalaktozyd),który,podobniejaklaktoza,
aktywujepromotorlaktozowy.PowstałafagowapolimerazaRNAwiążesięnastępnie
zpromotoremfagaT7wwektorzeekspresyjnym,cozkoleiindukujeekspresjętrans-
genuiwefekciesyntezęjegoproduktubiałkowego.
Silnepromotorywirusowestosujesiępowszechniewwektorachzarównopocho-
dzeniawirusowego,jakibakteryjnego.Należądonichpromotoryuniwersalne,takie
jakpromotorwirusacytomegalii,któryzapewniastałąekspresjętransgenówwkomór-
kachludzkich,orazpromotoryindukowane,któreuaktywniajątranskrypcjępopoda-
niuinduktora.
6
