Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
WYBRANeZAGADNIeNIAGeNeTYkIWPOŁOżNICTWIeIGINekOLOGII
14
dowychiuwidocznićzapomocąbromkuetydyny,sre-
zdolnośćspecyficznegowiązaniakomplementarnych
brzeniaazotanemsrebra,lub-wprzypadkusondzna-
sekwencjibadanegoDNA.Zastosowaniamikroma-
kowanychfluorochromami-zastosowaniafluorografii
cierzyto:diagnostykaaberracjichromosomowych
[13,106,114].
iniezrównoważonychmikrorearanżacjigenomowych,
CzęstoPCRjestdopierowstępemdodalszychbadań
diagnostykamutacjigenowychipolimorfizmów(mi-
-wówczassłużydoamplifikacjifragmentuDNA,
kromacierzeSNP),badanieekspresjigenówkodują-
wktórymmożewystępowaćmutacjalubpolimorfizm.
cychbiałka,badaniegenomównowotworów(precyzyj-
NastępnieproduktPCRjestsekwencjonowany(najczę-
neprognozowanieipersonalizacjaterapii),identyfikacja
ściej)lubmożenp.byćtrawionyodpowiedniodobra-
igenotypowaniepatogenów,badanieantybiotykoopor-
nymenzymemrestrykcyjnym,anastępniedokonujesię
nościifarmakogenomika.
analizydługościfragmentówrestrykcyjnych(PCR-
WarrayCGHnapłytcemikromacierzowejosadza
-RFLP)(ryc.1.6)[106,114].
siębardzomałefragmentychromosomowegoDNA;
Bezpośrednierozróżnieniealleluprawidłowego(dzi-
rozdzielczośćmetodyjestzależnaodliczbyumieszczo-
kiego)odalleluzmutowanegoumożliwiametoda
nychfragmentówimożewynosićod1Mbdo1kb.Na
ASAPCR(dziękiodpowiedniodobranymstarterom)
płytkęmikromacierzowąnakładasięDNApacjenta
iPCR-ASO(dziękiodpowiedniodobranymsondom
wyznakowanyfluorochromem,dającymzielonąfluore-
oligonukleotydowym).
scencję,wrazzDNAkontrolnymwyznakowanymflu-
KonwencjonalnaPCRjestmetodąjakościową-ilość
orochromem,dającymfluorescencjęczerwoną.Prze-
zamplifikowanegoDNAzależyodliczbycykli,alenie
wagazielonejfluorescencjinadanympoluwskazujena
odliczbykopiibadanegofragmentuDNA.Wceluilo-
duplikację,przewagaczerwonej-nadelecjęokreślo-
ściowegopomiaruliczbykopiigenuwgenomowym
negomateriaługenetycznegoupacjenta.Całośćobrazu
DNAopracowanoPCRwczasierzeczywistym(real-
-fluorescencjazkażdegopola-jestanalizowanaprzy
timePCR)[106,117].
użyciuprogramukomputerowego,awynikjestprzed-
SekwencjonowanieDNAmetodąSangerazampli-
stawionyzapomocąraportuzawierającegolistęgenów,
fikowanychfragmentówDNAjestnajczęściejstoso-
któreupacjentauległynp.duplikacjiczydelecji(ryc.
wanąmetodąbezpośredniejidentyfikacjimutacjiipoli-
1.7).
morfizmów.
Zsekwencjonować
można
wybrany
Badaniazzastosowaniemmikromacierzywykazały,
fragmentDNAzamplifikowanymetodąPCR(np.ek-
żemikrorearanżacjemateriaługenetycznegoprzy-
son,wktórymwystępująnajczęściejmutacje),analizo-
czynąwieluprzypadkówniepowodzeńrozrodu,dystro-
waćmożnatakżecałygen-wówczassekwencjonuje
fiiwewnątrzmacicznejpłodu,wadwrodzonych,opóź-
sięproduktyPCRwszystkicheksonów[106].
nieniarozwoju,niepełnosprawnościintelektualnej,
autyzmuiinnychpatologii.Stwierdzono,żewtych
grupachpacjentów,wktórychklasycznebadaniechro-
mosomówujawniaaberracjęchromosomowąu4%,ar-
1.4.4
rayCGHwykazujezmianymateriaługenetycznego
TeCHNIkAMIkROMACIeRZY
u20%badanych,zatem5razyczęściej.Ztychwłaśnie
ISekWeNCJONOWANIeNOWeJGeNeRACJI
względówmikromacierzeobecnieuważanezameto-
zwyboruwdiagnostycegenetycznejwwyżejwy-
Mikromacierzetoinnowacyjnametodabadaniamate-
mienionychsytuacjachklinicznych[70].
riaługenetycznegoopartananajnowszychosiągnię-
Opróczwielkiejrozdzielczościbadaniemetodąmi-
ciachtechnologicznych.Wporównaniuzdotychczas
kromacierzymajeszczejednązaletę,ważnązwłaszcza
stosowanymimetodami,takimijakklasycznebadanie
dladiagnostykiprenatalnej-wynikbadaniamożna
kariotypuczyFISH,hybrydyzacjenamikromacierzach
uzyskaćwciągu3dni.Ponadto,podobniejakwprzy-
umożliwiająanalizęwjednymbadaniucałegomateria-
padkuinnychmetodmolekularnych,badaniemetodą
ługenetycznego,przyrozdzielczościnieosiągalnejwe
mikromacierzymożnaprzeprowadzićrównieżnama-
wspomnianychmetodach.Możnaoczekiwać,żebędzie
terialearchiwalnym[3].
towkrótcejednazpodstawowychmetoddiagnostyki
Wginekologiiipołożnictwiebadaniezzastosowa-
genetycznej,którazastąpiwznacznejmierzem.in.dzi-
niemmikromacierzyjestzalecanewwieluczęstowy-
siejszetechnikianalizymikroskopowejchromosomów.
stępującychsytuacjachklinicznych,takichjak:poro-
Wzależnościodtypumikromacierzymożnabadać
nieniasamoistne-badaniegenetycznemateriału
dużeibardzomałeduplikacjeidelecjemateriaługene-
zporonienia(kosmówka),obumarciepłodupoItryme-
tycznego,mutacjeipolimorfizmy,atakżeekspresjęge-
strze-badaniekosmówkilubłożyska,diagnostyka
nów[70,77,93].
prenatalna,np.wprzypadkachwadwrodzonychupło-
MikromacierzDNA(DNAmicroarray)toszklana
du[41,91,93,112,122].Mikromacierzeniezwykle
lubplastikowapłytkawielkościszkiełkamikroskopo-
skutecznąmetodądiagnostykigenetycznejunowo-
wegoznaniesionymiwregularnychpozycjachpolami
rodkówzwadamirozwojowymi.Mikromacierzekli-
(spots)mikroskopijnejwielkości.Polatezawierająróż-
niczniemogąbyćskutecznetakżewwykrywaniusub-
niącesięodsiebiesekwencjąjednoniciowecząsteczki
mikroskopowych
zmian
materiału
genetycznego
DNA,któresondamimolekularnymimającymi
unoworodkówzdysmorfiąlubciężkądystrofiąwe-