Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
38
Badaniafizykochemicznewpreformulacjileku
MetodaPAMPA
Ocenazdolnościprzenikanialekuprzezbłonybiologicznezzastosowaniemtechni-
kiPAMPAstanowialternatywnąmetodędomodelibiologicznychbazujących
nakulturachkomórkowych(Caco-2iMDCK).Metodatazostaławprowadzona
dobadańprzezKansay’aw1998r.BarieręlipidowąwPAMPAstanowiąfosfolipidy
(fosfatydylocholinaijejanalogi,lecytynazjajka)rozpuszczonewdługołańcucho-
wymwęglowodorze,najczęściejwn-dodekanie.Roztwórfosfolipidówjestnałożony
naporowatysączek,tworzącsztucznąbłonęlipidową.Błonataoddzielakomorę,
określanąjakokompartmentdonorowy,wktórymznajdujesięroztwórbadanego
związku(naogółostężeniu25Mg/mL),odkomoryzawierającejczystybufor,okre-
ślanejjakokompartmentakceptorowy(ryc.2.19).
Rycina2.19.UkładPAMPA(parallelartificialmembranepermeabilityassay)-objaśnienia
wtekście.
AKCEPTOR
DONOR
bufor
lipidowabłona
lekwbuforze
Opracowanietechniki96-dołkowychmikropłytekofunkcjidonorowejlubakcep-
torowej,oddzielonychsztucznąbłonąlipidowąitworzącychukładnkanapkowy”,
umożliwiłozwiększenieliczbyrównocześniewykonywanychanaliz,przyograniczo-
nymzużyciumateriałówiodczynników.Badaniaprowadzonesąwstałejtemperatu-
rzeiwilgotnościwczasieod1do18godzin(wzależnościodbadanegozwiązku).
Oznaczeniejegostężeńwykonujesięprzedosiągnięciemstanustacjonarnego,po-
nieważpojegoosiągnięciuwyrównaniestężeńpoobydwustronachbłonyuniemoż-
liwiaocenęwspółczynnikaprzenikanialeku.Pomiarstężeniabadanegozwiązku
odbywasięwobydwukompartmentach(donorowymiakceptorowym)zzastosowa-
niemtechnik:chromatografiicieczowejpołączonejzespektrometriąmas(liquid
chromatography-massspectrometry–LC/MS),chromatografiicieczowejzdetekto-