Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
2.3.Mikroorganizmystosowanewmikrobiologiiprzemysłowej
41
produkcjinieglikozylowanejalbuminysurowicyludzkiejiglikozylowanych
szczepionek.SkonstruowanoszczepyzdolnedoN-glikozylacjitypuludzkie-
go,aproduktyjużwfazietestówklinicznych.Wysokiewydajnościbiałka
rekombinowanegomożnauzyskaćzapomocąPichiapastoris(10g/lczynni-
kapowodującegomartwicęnowotworu,14,8g/lżelatyny,15g/lmysiegoko-
lagenu,fitazyEscherichiacolii6g/llipazy/acetylotransferazyoraz6g/lgenu
Candidaparapsilosis).Białkabakteryjne,takiejakwewnątrzkomórkowy
fragmenttężcowyC,możnawytwarzaćzwydajnością12g/l.Albuminasuro-
wicybyłaprodukowanaprzezSaccharomycescerevisiaezwydajnośc
0,15g/l,aPichiapastorisprodukujewilości10g/l.Mówisię,żePichia
pastorismożewytworzyć20-30g/lrekombinowanychbiałek.Heterologiczna
ekspresjagenuuinnegogatunkumetylotroficznychdrożdżyHansenulapoly-
morphaspowodowałaprodukcję13,5g/lfitazy,ainnychbiałek-powyżej
10g/l.DozaletdrożdżymetylotroficznychwporównaniuzSaccharomyces
cerevisiaejakogospodarzemklonującymnależą:
1)wyższaproduktywnośćbiałka;
2)unikaniehiperglikozylacji;
3)wzrostprzytakichstężeniachmetanolu,którezabijająwiększośćinnych
mikroorganizmów;
4)taniaeksploatacjasystemu;
5)integracjawielokopiiobcegoDNAdochromosomalnegoDNA,dającego
stabilnetransformanty.
203030Grzybystrzępkowe
Grzybystrzępkoweatrakcyjnymigospodarzamitechnologiirekombinacji
DNAzewzględunazdolnośćdowydzielaniadużychilościbioaktywnych
białekzprzetwarzaniemposttranslacyjnym,takimjakglikozylacja.Aspergil-
lusnigerprodukuje25g/lnatywnejglukoamylazy.Obcegenymożnawłączyć
przezplazmidydochromosomówgrzybówstrzępkowych,gdziestabilniein-
tegrująsięzchromosomemjakopowtórzeniatandemowezapewniającedo-
skonałądługoterminowąstabilnośćgenetyczną.Podobniejakkomórkissa-
ków,grzybyposiadająsystemkomórkowydotranslacjibiałek,fałdowania
białekimodyfikacjiposttranslacyjnej.Podobniejakbakterie,grzybystrzęp-
kowełatwewhodowlinapodłożachzdefiniowanych.Rozwójgenetyczny
Aspergillusobejmuje:
1)układytransformacyjne;
2)konstruktyekspresyjne;
3)ukierunkowanąintegracjęimanipulacjęliczbąkopii;
4)promotory;
5)ulepszoneprojektowaniegenów;
6)inżynierięproteaz,wydzielanieiglikozylację;
7)narzędziadoznakowaniaiwyciszaniagenów.