Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
itakzmodyfikowanewiązkimogązesobąin-
Mikroskopfluorescencyjny.Wmikro-
terferować,dziękiichponownemuzłożeniu
skopiefluorescencyjnymdooświetleniaoglą-
przezkolejnypryzmatdwójłomnyznajdujący
danegoprzedmiotuużywasięświatłaemi-
sięzaobiektywem.Warunkiemjest,abyich
towanegoprzezwysokociśnieniowąlampę
płaszczyznypolaryzacjibyłyuzgodnioneprzez
rtęciowąlublampęksenonową.Lampartęcio-
obecnośćwtubusieanalizatora(ryc.1.1.4B).
waemitujeświatłobogatewpromieniowanie
Obrazy
przedmiotów
obserwowanych
nadfioletowe,niebieskieizielone,podczasgdy
wmikroskopieinterferencyjnymdajązłudze-
lampaksenonowatraktowanajestjakoźródło
nietrójwymiarowych(ryc.1.1.5B).Wprzy-
intensywnegoświatłabiałego,bogatewpasma
padkuobserwacjikomórek,podobniejak
podczerwone.Wmikroskopachfluorescen-
wmikroskopiekontrastowo-fazowym,dosko-
cyjnychpreparatoświetlanyjestprzezobiek-
naleuwidocznionesąstrukturywewnątrzko-
tyw(oświetlenieEPI)wprzeciwieństwiedo
mórkowe.Trzebajednakpamiętać,żeefekt
konwencjonalnychmikroskopówprostych,
kontrastupowstajedziękizmianiewspół-
wktórychpreparatjestoświetlanyprzezkon-
czynnikazałamaniaświatła(n)środowiska
densor-prześwietlany(oświetlenieDIA)
przedmiotuiobiektówznajdującychsięwjego
(ryc.1.1.6).Oświetlonyświatłemokrótkiejfali
wnętrzu.Zatemniewszystkieobserwowane
(światłowzbudzające)preparatemitujesłabe
obiektybędąkonkretnymistrukturami,lecz
światło(fluorescencjapierwotna;autofluore-
mogąbyćjedynielokalnymnagromadzeniem
scencja)odłuższejfali.
substancjioodmiennymn.Ilościoweokreśle-
Zwykledopreparatówkomórkowychlub
niezmianwfaziewiązekświetlnychwzględem
tkankowychdostarczasiębarwniki-flu-
siebiepozwalanazmierzeniewieluparame-
orochromy,któresilnefluoryzują(fluore-
trówprzedmiotu,np.:suchejmasy,współ-
scencjawtórna).Dziękitemukontrastmiędzy
czynnikazałamaniaświatła(n),grubości,stę-
barwionymielementamiapozostałączęścią
żenianiektórychsubstancjiitp.
przedmiotulubtłemjestznaczniewiększy,co
DIA
EPI
RYC.1.1.6.SchematprostegomikroskopuoptycznegozoświetleniempreparatutypuDIA
(diaskopowym;lewy)iEPI(episkopowym;prawy).PrzyoświetleniuDIAświatłopochodzące
odlampyhalogenowej(lubLED)jestskupianeprzezkondensor,przechodziprzezprzedmiot
itrafiadoobiektywu.DIAtoklasycznysposóboświetlaniapreparatówbiologicznychwjasnym
polubądźkontraściefazowym.WoświetleniuEPIobiektywodgrywarolękondensora,skupia-
jącwiązkęświatłanapreparacieorazformującobrazprzedmiotuzasprawąświatłaodbitego
lubwtórnieprzezeńgenerowanego.SystemEPIjesttypowydlamikroskopiifluorescencyjnej,
aźródłoświatłatonajczęściejlampartęciowalubksenonowa.
6
Podstawowetechnikibadawcze
