Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
(ang.ReversedPhase-HighPerformanceLiquidChromatography)[5].Najczęściej
wnormalnymukładziefazrozdzielasięwielopierścieniowewęglowodoryaromatyczne,
aminy,amidy,iminy,alkohole,fenole,sacharydy,kwasykarboksylowe,aminokwasy,
peptydy,kwasynukleinoweiinne.Układtakimasporoograniczeń,ponieważwymaga
stosowaniabezwodnychrozpuszczalnikówowysokiejczystości.Obecnieobszarzasto-
sowańmetodyNP-HPLCzmniejszasię,gdyżtenrodzajchromatografiijesttrudnydo
połączeniazespektrometriąmas.Nawetniewielkazawartośćwodyobecnejwfazie
ruchomej(0,01%)powodujeuzyskiwanieniepowtarzalnychczasówretencjiiwpływa
negatywnienakształtotrzymywanychpików.WtechniceHILICmamydoczynienia
zwielomamechanizmamirozdzielania.Retencjaanalitówwzrastazewzrostemhydro-
filowościanalitu.JakopisujetoBuszewskiiwsp.[59]napowierzchnifazystacjonarnej
tworzysiępodwójnawarstwaelektryczna.FazystacjonarnestosowanewHILICmożna
podzielićna:żelkrzemionkowy,fazyneutralne,fazynaładowane,fazybipolarneoraz
fazytypuRPlHILIC[60].
Mechanizmrozdzielaniaanalitówopierasięzarównonawykorzystaniubezpośred-
nichoddziaływańpomiędzyfaząstacjonarnąifaząruchomą,jakizastosowaniuwody
zdodatkiemmodyfikatorajonowego.Najczęściejjegozawartośćnieprzekracza0,1%
objętości,copowoduje,żenapowierzchniziarensorbentutworzysięwarstwaeluentu
ozwiększonejzawartościwody.Migrująceprzezkolumnęchromatograficznąanality
podlegająoddziaływaniom,którezachodząpomiędzywarstwąfazyruchomejodużej
zawartościskładnikaorganicznegoawarstwązaadsorbowanejwody.Chromatografia
HILICpoleganawykorzystaniupolarnejfazystacjonarnejipolarnegoeluentu,zawie-
rającegowodę.FazystacjonarnestosowanewchromatografiiHILICtonajczęściej
żelkrzemionkowymodyfikowanygrupamiaminowymi,amidowymi,cyjanowymi
bądźgrupamihydroksylowymi(fazastacjonarnatypudiol)lubpolarnepolimery.
Fazęruchomąstanowinatomiastmieszaninarozpuszczalnikóworganicznychzwodą.
Imwiększajestzawartośćwodyweluencietymsiłaelucjifazyruchomejjestwiększa.
WkolumnachHILICnapowierzchnihydrofilowejfazystacjonarnejtworzysięcienka
warstwawodyzaadsorbowanejzeluentu.Tak,więcnastępujepodziałpolarnegoanalitu
pomiędzyhydrofilowąwarstwąwodnąnapowierzchnistacjonarnejamniejhydrofi-
lowymrozpuszczalnikiem(np.acetonitrylem).WtechniceHILICwykorzystywane
sąróżnorodnemechanizmyretencji,któreniestetyniesądokońcapoznaneiopisane
wliteraturzenaukowej.
Technikatazostaławprowadzonawpołowielat70-tychXXwieku,początkowodo
rozdzielaniawęglowodanów.Najczęściejkolejnośćelucjioznaczanychsubstancjizacho-
dziodnajmniejdotychnajbardziejpolarnych.Jednakodtejregułysąwyjątki.Wystę-
pująoneszczególniewtedy,kiedyfaząstacjonarnąjestmodyfikowanyżelkrzemion-
kowy.Możnapowiedzieć,żetechnikaHILICłączywsobieelementychromatografii
wnormalnymukładziefaz,wodwróconymukładziefazorazwymianyjonowej.HILIC
nadajesiędooznaczaniaanalitów,którewtechniceRP-HPLCsąwymywaneblisko
objętościmartwejiobejmujezarównozwiązkipolarneijonowe,któresąrozpuszczalne
wfazieruchomej(wodzie).WprzeciwieństwiedoNP-HPLCniejestwymaganedoda-
waniesubstancjitworzącejparyjonowe,coupraszczaoznaczanieiumożliwiadetekcję
MS.Dorozdzielaniamałocząsteczkowychzwiązkóworganicznychzpowodzeniem
1030Terminyidefinicjestosowanewchromatografiijonowej
35
