Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
18
Ćwiczeniazimmunologii
czynnikizdolnedopobudzeniawłaściwościredukcyjnych,np.lipopolisacharydy
orazniektóreegzotoksynybakteryjne.Właściwościredukcyjnesąnatomiastha-
mowaneprzezniektóreśrodkiprzeciwzapalne,np.kortykosteroidyczyaspirynę.
TESTZBŁĘKITEMNITROTETRAZOLIOWYM(NBT)
Materiały
1.Heparynowanakrewludzkalubbydlęca(50j.heparyny/ml).
2.0,1%roztwórbłękitunitrotetrazoliowego(NBT)wzbuforowanymroz-
tworzesolifizjologicznej(PBS).
3.Silikonowaneprobówkiwidalowskie.
4.Czysteszkiełkapodstawowe.
5.Alkoholmetylowy.
6.BarwnikGiemsy.
Wykonanie
Wsilikonowejprobówcewidalowskiejzmieszać0,5mlkrwii0,5mlroz-
tworuNBT.Inkubowaćwłaźniwodnejotemp.37oCprzez25min.,anastępnie
wtemperaturzepokojowejprzez15min.Wykonaćrozmazkrwinaszkiełkupod-
stawowym,wysuszyćiutrwalićwalkoholumetylowymprzez5min.Wysuszony
preparatbarwićprzez15min.rozcieńczonym(1:20)wodądestylowanąbarwni-
kiemGiemsy.Preparatyspłukaćwodądestylowanąiponowniewysuszyć.Wpre-
paratachoglądanychpodimersjąobliczyćliczbęneutrofilówzezłogaminiebie-
skiegobarwnikanaogólnąliczbę100wyszukanychwpreparacieneutrofilów.
PREPARATYKALEUKOCYTÓWZKRWIŚWINKIMORSKIEJ
Zsercaświnkimorskiej,wnarkozieeterowej,pobraćkrewwilościokoło4ml
dostrzykawkizawierającej1mlheparyny(250j.heparyny).Krewheparynowa-
nązmieszaćwproporcji1:1z6%roztworemdekstranu(omasiecząsteczkowej
70000)wpłyniefizjologicznym.Zawiesinęwymieszaćizostawićwtemperatu-
rze37oCprzez1godz.Supernatantbogatywneutrofilezebrać,odwirowaćprzy
500xgprzez5min.,przemyćdwukrotniepłynemEagle3airozcieńczyćtak,aby
uzyskaćzawiesinęogęstości1x107leukocytów/ml.
PREPARATYKAKOMÓREKWYSIĘKUOTRZEWNOWEGOMYSZY
Myszompodaćdootrzewnowopo0,1ml0,9%glikogenuwpłyniefizjolo-
gicznym.Po5dniachmyszyuśpić,dojamyotrzewnowejwstrzyknąć7mlpły-
nuEagle3azdodatkiem10%surowicycielęcej,lekkopomasowaćbrzuchmyszy
istrzykawkąpobraćpłynzkomórkamiwysiękowymi.Zawiesinęodwirowaćprzy
500xgprzez5min.iprzemyćdwukrotniepłynemEagle3a.Komórkirozcieńczyć
płynemEagle3atak,abyotrzymaćzawiesinęogęstości1x107makrofagów/ml.
