Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
12
AgnieszkaBachmura,AleksandraSztybor
poprzezpomiarliczbycząsteczekookreślonejsekwencjiwkażdymcyklu
temperaturowym(Baliin.2007).Pomiarstężeniaprodukowanegoamplikonu
możliwyjestdziękizastosowaniuspecyficznychsondmolekularnychposiada-
jącychznacznikifluorescencyjnelubniespecyficznychcząsteczekfluoroforów
wiążącychsięzdwuniciowymDNA.Aparaturaumożliwiającaprzeprowadza-
niereakcjiqPCRpozablokiempozwalającymnaszybkązmianętemperatury
wprobówkachmusitakżeposiadaćźródłopromieniowaniaUVorazdetektor
światła(spektrofluorymetr)zfiltramidającymimożliwośćmierzeniapojedyn-
czychdługościfalielektromagnetycznej(Szweykowska-Kulińskaiin.2007).
PodstawowąróżnicąmiędzymetodamiqPCRaklasycznymPCRjestkrót-
szyprzebiegpoprzezeliminacjęetapuszacowaniajakościiilościproduktupo
zakończeniureakcji,poprzezzastosowanietechniktakich,jakelektroforeza
wżeluagarozowym,testimmunoenzymatyczny(ELISA)czyhybrydyzacja
Southerna(Wyczałkowska-Tomasikiin.2009).qPCRumożliwiaoszacowanie
ilościcząsteczeksubstratowegoDNAlubcDNApoprzezwglądwkinetykę
reakcji.Ponadto,ilościowyPCRpozwalanazminimalizowaniezanieczysz-
czeniaproduktudziękiamplifikacjikwasównukleinowychidetekcjiichliczby
wjednymzamkniętymnaczyniu.
JednymzpierwszychetapówqPCRinajważniejszymdlaspecyficzności
przebiegutejreakcjijestprojektowanieisyntezaparyspecyficznychstarterów
flankującychwybranyfragmentkwasunukleinowego-DNAlubcDNA(Yeiin.
2012).Starterysąkrótkimijednoniciowymisyntetycznymioligonukleotydami
DNA.Występujądwatypystarterów:starterprzedni(ang.forward),którego
sekwencjajesttakasamajakfragmentupowielanegoorazstarterwsteczny
(ang.reverse),któryjestkomplementarnydofragmentupowielanego(Barylski
2009).MetodaqPCRjestbardziejefektywna,ponieważpozwalanauzyskanie
precyzyjnychwynikówprzystosunkowoprostymprocesieprzedanalitycznym.
Wprowadzenietejmetodydowszystkichlaboratoriówdiagnostycznychniejest
możliwe,ponieważnadalwymagaopracowaniajednolitychprocedur,które
usystematyzująprojektowaniespecyficznychstarterówiwdalszejperspekty-
wieprzyczyniąsiędoujednoliceniawynikówbadańwykorzystującychqPCR
(Wyczałkowska-Tomasikiin.2009).
Wrazzrozwojemmetodbiologiimolekularnej,szybkowzrastaliczbadostęp-
nychnarzędzibioinformatycznych,którewedługzałożeńmajązautomatyzować
etapybadańnaukowychorazanalizdiagnostycznych,szczególniewrażliwych
nabłędypopełnioneprzezbadacza.Obecniestałysięoneniezbędnedozwięk-
szeniaproduktywnościtestówmolekularnych(acozatymidzieskrócenie
czasuuzyskaniawyników)orazwzrostuilościijakościuzyskiwanychwyników
(Stockingeriin.2008).Odpowiednidobórnarzędzibioinformatycznychoraz
