Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
Rys.2.9.Cząsteczkainsulinyztrzemawiązaniamidwusiarczkowymi:śródłańcuchowym(A6łA11)oraz
dwomamiędzyłańcuchowymi(A7łB7iA20łB19)
niewysokiejczystości.Zgodnieznią
psynarozszczepiagłówniewiązaniapepty-
najpierwustalasięskładaminokwasowy
dowe,wktórychbierzeudziałgrupakarbo-
i
masę
cząsteczkową
rozdzielonych
ksylowalizynyiargininy,achymotrypsy-
ioczyszczonychbiałek.Białkazłożone
na—wiązania,wktórejestzaangażowana
zkilkupodjednostekrozdysocjowujesię
grupakarboksylowaaminokwasówaroma-
napojedynczełańcuchypolipeptydowe
tycznych.Dlakażdegopojedynczegofrag-
zapomocąodczynnikówdenaturujących,
mentuoznaczanajestkolejnośćaminokwa-
m.in.stężonegoroztworumocznika(8
sów.Przezskładanieposzczególnychsek-
mol/l)lubdodecylosiarczanusodowego
wencjidochodzisięwkońcudopełnej
(ang.sodiumdodecylsulphate;skrót
strukturypierwszorzędowejwyjściowego
—SDS).Mostkidisulfidowerozszczepia
łańcuchapolipeptydowego.
sięredukcyjniezapomocą2-merkap-
Nawiązującdorozpatrywaniasekwencjiamino-
toetanolu(2-ME).Powstającewtejreak-
kwasowej,jakotestuzawierającegoinformacjedla
cjigrupyłSHblokowanesąodwracal-
strukturyifunkcjitegobiałka,określasięnajpierw
liczbęwierszy(łańcuchówpolipeptydowych),ana-
nie,np.wwynikualkilowaniakwasem
stępniekażdywierszdzielonyjestnagłoskilub
jodooctowymwceluzahamowaniadal-
krótkiesłowa(produktyproteolizy).Pozanalizowa-
szychichreakcjilubponownegoutlenie-
niuichzestawiasięwszystkiefragmentyiposługując
nia.PooznaczeniuN-iC-końcowych
sięzwykłąkombinatoryką—podobnądostosowanej
aminokwasówłańcuchpolipeptydowyjest
przyrozwiązywaniukrzyżówek—odczytujesię
danytekst.Zgodniezprzykłademzaczerpniętym
rozszczepianyzapomocączęściowejhyd-
zksiążkiWolkensztejna[P85,s.105],jeżeliwwy-
rolizyenzymatycznejnamniejszefrag-
nikujednegorozkładu(np.proteolizytrypsyną)
menty.Najczęściejstosujesięoddzielną,
otrzymanomieszaninęfragmentówzidentyfikowa-
częściowąproteolizęzapomocąkilku
nychjako:BIA,POD,CIA,STA,ŻY,ŁKO,WA,
proteaz,np.trypsynyichymotrypsyny,
awwynikudrugiego(np.proteolizychymotryp-
syną):IA,PO,KO,WA,AŁ,BI,DSTA,ŻYĆ,to
uzyskującodpowiedniepeptydytryptycz-
możnaodczytaćtekst:BIAŁKO—PODSTAWA
neichymotryptyczne.Wiadomo,żetry-
ŻYCIA.
34