Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
2.1.Dobórmikroorganizmówstosowanychwbiotechnologii
Innymważnymczynnikiemwutrwalaniudrobnoustrojówjestkontrola
tempazamrażania.Procestennależyprowadzićwtakisposób
,
abyzapewnić
tworzeniedużejliczbymałychkryształówlodu.Wiadomo,żepowstaniedużych
kryształówmożeprowadzićdorozrywaniaściankomórkowych.Znanychjest
wielemetodkontrolowanego,stopniowegozamrażaniakomórekdrobnoustr
jów.Najczęściejampułkizawierającekulturywroztworzezglicerynąumieszż
czasięwmetalowychpojemnikach
,
którewstawiasiędozamrażarkizkontroż
lowanymtempemzamrażania.
Tempozamrażaniaustalasiętak
,abywynosiło1j2OC/min
,
dopókinieuzysż
kasiętemperaturykilkastopnipowyżejpunktuzmianyfaz
,
któryzazwyczajwyż
stępujeprzytemperaturzeok.j30OC.Szybkieuzyskanietejgranicyosiągasię
,
prowadzączamrażaniewkomorzezciekłymazotem.Poprzekroczeniutejtemż
peraturyiosiągnięciupunktuzmianyfaz
,
zmniejszasiętempodalszegoochładzaż
niado1OC/minikontynuujezamrażaniedotemperaturyj50OC.
Utrwalonewtensposóbkulturyprzechowujesięwzamrażarcezciekłym
azotemwtemperaturzeodj156OCdoj196OC.Systemydozamrażaniawciekłym
azociegwarantująnajniższądostępnątemperaturęmrożenia
,
niewymagająstoż
sowaniakompresora
,
zapewniającpraktyczniebezawaryjnąobsługęurządzeń.
Ponadtosystemytezapewniająlepszewykorzystaniedostępnejpowierzchni
laboratoryjnej.Kosztzakupuieksploatacjisystemówmrożeniawciekłymazoż
ciejestbardzoniskiwporównaniuzkosztamiinnychsystemówzamrażania.
ugotrwałeprzechowywaniewartciowychtkanekstanowijednakduży
problem.Najszerzejstosowaobecniemetoprzechowywaniakulturrlinż
nychjestichzamrażaniewniskichtemperaturach
,
tj.zamrażaniewciekłym
azocie(j196OC)orazwitryfikacja.Polegaonanajednostopniowym
,
głębokim
zamrażaniumateriałubiologicznegowzawiesiniekrioochronnejostężeniupoż
nad8mol/dm
3
,
anastępnienagwałtownymobniżeniutemperaturydoj196OC.
Dużeciśnienieosmotyczneroztworukrioochronnegopowodujeszybkieodwodż
nienie
komórkiiwyrównanieciśnieniawewnątrzkomórkowegozciśnieniem
zewnętrznym.
Jednocześnieprzeprowadzasięgwałtownezamrażanie
,
rzędu
1000OC/min.Wtakichwarunkachniedochodzidotworzeniasiękryształów
lodu
,
leczcałamasazmieniasięwjednolitątaflęlodu.Decydującąrolęwzaż
chowaniużywotnościkomórekodgrywaprzedewszystkimsposóbrozmrażania
,
którepowinnoprzebiegaćmożliwieszybko
,
gdyżwprzeciwnymraziedochodzi
dowtórnegorozrastaniasiękryształówloduizniszczeniakomórek.Najczęściej
procesrozmrażaniaprzeprowadzasięprzezzanurzenieampułekzawierających
zamrożonymateriałdowodyotemperaturzeok.40OC.Porozmrożeniunależy
usunąćlubrozcieńczyćmieszaninękrioochronnąwceluzmniejszeniaciśnienia
osmotycznego.
Hodowlarozmrożonychkomórekpowinnabyćprowadzona
wpożywceoskładzieumożliwiającymdobrąregeneracjęiwzrostkomórek.
Wzasadzieniemazbytdużychróżnicwprzeżywalnościdrobnoustrojów
w
zależności
od
temperaturyichprzetrzymywania:j70OC(wzamrażarkach
49