Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
Charakterystykafizykochemicznasubstancjileczniczej
41
MetodaIAMHPLC
WmetodzieIAMHPLCdoocenyprzenikaniazwiązkówprzezbłonybiologiczne
stosujesiękolumnychromatograficzne,wktórychwypełnieniestanowitzw.sztucz-
nabłonabiologiczna(immobilizedartificialmembrane–IAM).Zbudowanajest
onazfosfolipidów(np.fosfatydylocholiny,fosfatydyloseryny,fosfatydylometanol-
aminy)kowalencyjniezwiązanychnażelukrzemionkowym.Symulująoneśrodowi-
skolipidowebłonykomórkowej(ryc.2.20aib).
Fazęruchomązazwyczajstanowimieszaninawoda/acetonitryl(85:15v/v)wukła-
dzieizokratycznym.Wniektórychprzypadkachwceluzapewnieniawarunkównaj-
bardziejzbliżonychdofizjologicznychstosujesięwfazieruchomejbuforfosforano-
wy(phosphatebuffersolution–PBS)(pH7,4;0,027mol/LKCli0,137mol/LNaCl)
zdomieszkąacetonitrylu(15%v/v).Dlalekówodużejlipofilnościopracowanoana-
lizęwukładziegradientowymwoda/acetonitryl,żebyskrócićczasjejtrwania.
Miarąpowinowactwabadanejsubstancjidofazylipidowejjestwspółczynnikpo-
jemnościowyK
IAM
,któryobliczasięzrównania:
K
IAM
=
t
R
t
-t
o
o
(2.56)
gdzie:t
R
oznaczaczasretencjibadanejsubstancji,t
o
-czasmartwy,czyliczasretencjisub-
stancji,któranieulegazatrzymaniunakolumnie,np.kwascytrynowy(ryc.2.20c).
WartośćK
IAM
zwiększasięwrazzewzrostempowinowactwalekudofazylipi-
dowejikorelujezezdolnościąjegoprzenikaniaprzezbłonybiologiczne.
ZaletąmetodyIAMHPLCjestbrakwrażliwościnazanieczyszczenia,możli-
wośćstosowaniamałejilościpróbkidobadańorazkrótkiczasanalizy.
Rycina2.20.Przenikaniesubstancjileczniczejprzezdwuwarstwowąbłonęlipidowąwwa-
runkachinvivo(a)orazimmobilizowanąsztucznąbłonęIAM(b),chromatogramsłużący
doobliczaniaK
substancja
badana
dwuwarstwowa
lipidowabłona
IAM
a
(c).
immobilizowana
sztucznabłona
krzemionka
b
t1
chromatograficzny
rozdział
czas
c
t
R
