Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
32
Proteomikaimetabolomika
Każdyzelementówbibliotekikombinatorycznejjestnaniesionynapo-
wierzchnięjednegoziarnapolimeruiwiążeokreślonebiałko.Wynikastąd,że
kompletnabibliotekaskładasięz109–1012ziaren,dodawanychdokażdejbadanej
próbki.Białkawystępującewdużychstężeniachwiążąsięjedyniewniewielkim
stopniu,ponieważwiązaniadlanichzostająszybkowysyconeiwtensposóbnie
konkurujązinnymielementamipróbki.Natomiastbiałkawystępującewmałych
stężeniachwiążąsięwcałości,ponieważniewysycająodpowiednichmiejscwią-
żących.Zasadadziałaniatejtechnikiniepozwalazatemnaoznaczeniailościowe.
Rozdziałbiałekzużyciembibliotekikombinatorycznejligandówprzedstawiono
narysunku4.5.
7.Ekstrakcjadofazystałej(SPE,ang.solidphaseextraction)–wmetodzie
tejwykorzystujesięmikrokolumienkiwypełnionefaząstacjonarną,tąsamą,
którasłużydowypełnianiakolumnchromatograficznych(HPLC).Dostępnych
jestwieletypówmikrokolumienek(rys.4.6)odpowiednichdlaróżnychtypów
próbekbiologicznych.SPEstosujesięnietylkodozatężania,leczrównieżdo
oczyszczaniamateriałuzsoli,detergentówiinnychzanieczyszczeń.Używasię
różnegorodzajuwypełnienia,zarównohydrofobowe–dorozdziałuwfazieod-
wróconejdlazwiązkówsłabopolarnych,jakihydrofilowe,jonowymienne,czy
wypełnieniaowłaściwościachmieszanych,zarównofazyodwróconej,jakijo-
nowymiennej.
DziękizastosowaniuSPEproduktyrozdziałucharakteryzująsięwysokim
stopniemczystościorazstężeniem,umożliwiającymidentyfikacjęproduktów
oczyszczaniatakimitechnikamijaknp.spektrometriamas.Objętośćpróbkimoże
byćzminimalizowanadonawetkilkumikrolitrów.
OpróczwypełnieńnajczęściejstosowanychdoSPE,wysoceobiecującesą
złożaskomponowanezwykorzystaniempolimerów,zpamięciąkształtuczą-
steczki(MIP,ang.molecularlyimprintedpolymers).MIPjesttakskonstruowany
(rys.4.7),abynaśladowaćzwiązek,którychcemyoczyścić,powodującselek-
tywnąadsorpcjęnapowierzchnifazystacjonarnej.Wtokupolimeryzacjidopo-
wierzchnipolimerowejzostajewbudowanyzwiązek–matrycazwiązku,któ-
Rys.4.6.KolumnydoSPE.
Kolumienkapierwszazprawej
przygotowanawwarunkach
laboratoryjnychzkońcówki
pipetyiniewielkiejilościziaren
fazyodwróconej
