Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
iupewnieniesię,żewmaterialeprzeznaczonymdotegobadaniawystę-
pujeodpowiedniowysokiodsetekkomóreknowotworowychwstosunku
doprawidłowych.Natymetapiekluczowymelementemjestprocentowa
ocenautkanianowotworowegowpreparacie,przeprowadzonapobar-
wieniuHE.Patologzaznaczanapreparacieobszarutkanianowotworo-
wego,amateriałdoizolacjiDNApowinienzostaćpobranyjedynieztego
obszaru.Zbloczkówparafnowychskrawanastępniekilkafragmentów,
tzw.skrawków.Ichliczbajestuzależnionaodwielkościtkankinowotwo-
rowejzatopionejwbloczku.
Koniecznypodkreśleniajestrównieżfakt,preparatwybarwionyHEdo
ocenyzawartościprocentowejnowotworumusibyćwykonanybezpo-
średnioprzedpreparatemdoanalizymolekularnej.Wprzeciwnymrazie
zawartośćkomórekguzawpreparaciewybarwionymHEiwpreparatach
przygotowanychdobadaniamolekularnegomożesięznaczącoróżnić,
atozkoleimożespowodowaćfałszywywynikbadaniamolekularnego.
Przyjmujesię,żedouzyskaniawiarygodnegowynikuanalizowanypreparat
powinienzawieraćniemniejniż20%utkanianowotworowego.Zalecasię
jednak,abykażdypreparatbyłtakprzygotowany,abyanaliziepoddawa-
nebyłyniemalwyłączniekomórkinowotworowe.Zapobiegatobłędowi
analitycznemupolegającemunaanaliziesygnałupochodzącegozDNA
komórekprawidłowych.Wwyjątkowychprzypadkachdopuszczasięsto-
sowaniepreparatówzawierającychmniejszeutkanienowotworowe,jednak
wtakichsytuacjachniezbędnejestużyciemetodyanalitycznejopodwyż-
szonejczułości.Wceluuzyskaniawysokiegoodsetkakomóreknowotwo-
rowychstosujesiętzw.makrodysekcjępolegającąnamanualnymodsepa-
rowaniutkankiprawidłowejodnowotworowej.Makrodysekcjamożebyć
przeprowadzonanaszkiełku(zwyklemateriałjestpobieranyz2-3szkiełek,
gdziegrubośćskrawkanieprzekracza4-5um).
Kolejnymetapempostępowaniajestekstrakcjakwasównukleinowych.
Obecniezalecasięstosowaniezestawówkomercyjnychprzeznaczonych
doizolacjimateriałuutrwalonegowparafnie,dziękiczemumamypew-
ność,żeizolatybędąprawidłowooczyszczonezinhibitorówreakcjienzy-
matycznychstosowanychwmetodachanalitycznych.Mogątobyćzestawy
manualnelubprzeznaczonenaautomatycznestacjedoizolacjikwasów
nukleinowych.
Wyizolowanymateriałgenetycznypodajesięoceniejakościowejiilo-
ściowej.Wtymcelupowinnosięstosowaćsystemyfluorymetryczne
METODYBIOLOGIIMOLEKULARNEJWIDENTYFIKACJIZMIANGERMINALNYCHISOMATYCZNYCHWCHOROBACHPŁUC
15