Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
1040SekwencjonowanfieDNA
23
104030OznaczanfiefiloścfiDNAmetodąspektrofotometryczną
IlościDNAiRNA9oligonukleotydów9anawetmononukleotydów9mogąbyć
mierzonebezpośredniowroztworzewodnymwformienierozcieńczonejlub
rozcieńczonej.Wyznaczasięjeprzezpomiarabsorpcji(absorbancji)Awświetle
ultrafioletowym>1.35].Pomiarjestprostyidokładny(patrztomII9podrozdz.4.5).
ZasadywchodzącewskładDNAiRNAnieabsorbująświatławidzialnego9
dziękiczemukwasypolinukleinowesąodpornenafotodegradacjępodwpływem
częściwidzialnejświatłasłonecznego(400-800nm).Zdolnośćkwasównukleino-
wychDNAiRNAdoabsorpcjipromieniowaniaUV(200-400nm)(rys.1.9a9b)
możnawykorzystaćdoich.
-wykrycia;
-oznaczeniailościowego;
-określeniastopniaczystości-stosunekA260/A280jestocenąstopniaczystości9dla
czystegoDNAwynosion1989adlaRNA290.
AbsorbancjakwasównukleinowychDNAiRNAzależyod.
-składuzasadistrukturydrugorzędowej;
-środowiska-absorbancjaizolowanychzasadjestwiększaniżabsorbancjaRNA
ijednoniciowegoDNA9którazkoleijestwiększaniżdwuniciowegoDNA9
któryjesthipochroniczny(mniejbarwny)wporównaniuzjednoniciowym
DNA.
Ax10-3
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
200
uracyl
guanina
240
λnm
adenina
260
280
cytozyna
tymina
300
Rys.1.9.WidmaabsorpcyjnezasadpirymidynowychDNA
