Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
42
10KwasynuklefinoweDNARNAļkluczedosyntezybfiałek
10100KlonowanieDNA
Dużegenomyssaków9zawierająokoło20tys.genów.WDNAwyizolowa-
nymzludzkichkomóreksekwencjeposzczególnychgenówwystępująwbardzo
małychilościach.KlonowanieDNAjestmetodąnamnażaniauprzedniowyizolo-
wanychfragmentówkwasównukleinowychDNA>1.119-1.123].Poleganawpro-
wadzaniutychfragmentówzapomocąodpowiednioprzygotowanychwektorów
(plazmidów)dokomórki9anastępnieichponownejizolacjiponamnożeniu.Klo-
nowanieDNApozwalanauzyskaniewieluidentycznychkopiifragmentuDNA9
naprzykładdocelowegogenu.
Procesklonowaniazwierzątpolegana(rys.1.17).
-usunięciuzbakteriiE.colijądrakomórkowego9tymsamyminformacjigene-
tycznejwnimzawartej;przygotowanedotegozabiegubakteriepoddajesięszo-
kowicieplnemuwwysokiejtemperaturze9copodnosiprawdopodobieństwo9że
przyjmądocelowygen;
-wklejeniudocelowegogenukodującegobiałkawkolistącząsteczkęDNAzwaną
plazmidem-wtypowymklonowaniu(rys.1.17).
Plazmidpoddajesiędziałaniubakteryjnychenzymówrestrykcyjnych(endo-
nukleazyrestrykcyjnej)9wwynikuczegonastępujerozcięciekulistegoplazmi-
duwliniowąformęzlepkimikońcami.Wklejeniedoniegodocelowegogenu
polegana.
-rozcięciu(hydrolizacji)niciDNAdocelowegogenu9nakrótkiefragmenty
zlepkimikońcamiprzyużyciuenzymówrestrykcyjnych;
-pozmieszaniurozciętegoplazmiduzrozciętyminićmiDNA9ichcząsteczki
łącząsiępoprzezlepkiekońce9akowalencyjneichzwiązanienastępujepo
dodaniuenzymuligazy9wwynikuczegopowstajązrekombinowanekoliste
plazmidy9orozmiarachok.3kpz.
plazmid
niegodocelowegogenu
rozcięcieplazmidu
iwklejeniedo
rozciętyplazmid
którazespala
ligazaDNA,
gendocelowy
odtworzony
plazmid
Rys.1.17.Wklejaniegenuwplazmid