Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
4.Przygotowaniemateriałubiologicznegodoanalizy
TABELA4.1.Podstawoweźródłapróbekbiologicznych
23
Materiał
biologiczny
Tkanki
zwierzęce
Tkanki
roślinne
Hodowle
komórkowe
Płyny
ustrojowe
Bakterie
Wirusy
Cechycharakterystyczne
Zwyklewybieranesątkanki
zmienionechorobotwórczo,
pochodząceodmyszy
iszczurów(czasemodzwierząt
transgenicznych).Tkankazawiera
lipidy,którenależyusunąć,jeślinie
sąobiektembadania.
Kluczowymelementemjest
zniszczenieścianykomórkowej,
zbudowanejzcelulozy
ijejpochodnych(hemiceluloza,
pektyna).Komórkiroślinne
zawierajądużopolifenoli,lipidów,
kwasóworganicznych,terpenów,
pigmentów.
Hodowlezapewniająmożliwość
badaniakomórekokreślonego
typu.
Krew:elementymorfotyczne,
osocze,surowica–próbkazłożona,
składającasięzwielubiałek
oróżnychstężeniach.
Osocze–krewpozbawiona
komórek.
Surowica–krewpozbawiona
czynnikówkrzepnięcia.
Płynmózgowo-rdzeniowy:próbka
złożona,stężeniewystępujących
wnimbiałekjestmałe.
Mocz:łatwydouzyskania.Małe
stężeniebiałek,dużestężenie
soli,dużeobjętości.Oznaczenia
ilościowewymagajązbiórki
dobowej.
Ślina:próbkałatwodostępna,
zawieramucynę.
Potencjalneźródłonowych
szczepionekilekówbiałkowych.
Łatwahodowla,leczwymagająca
odpowiednichzabezpieczeń.
Źródłembiałekjestkapsyd.
Hodowlawymagaodpowiednich
zabezpieczeń
Specyfkawstępnegoprzygotowania
Minimalizacjaheterogennościpróbki(poprzez
usunięciem.in.elementówkrwi,osocza,itp.).
Próbkęhomogenizujesię,anastępniepoddaje
wirowaniuróżnicowemuwceluizolacji/usunięcia
organellikomórkowych.Lipidyusuwasięstosując
wirowanie.
Stosowanienp.buforówlizujących,lizę
znaprzemiennymzamrażaniemirozmrażaniem,
ultradźwięki.Charakterystycznedlaroślin
zanieczyszczeniausuwasiępoprzezzanurzenie
próbkiwacetonielub10%kwasietrichlorooctowym
wacetonie.
Konieczneusunięciepożywkiprzedkolejnymi
etapamiprzygotowaniadoanalizy.
Poszczególneelementymorfotycznekrwiotrzymuje
siępoprzezwirowanieróżnicowe(np.stosując
gradientgęstości).Białkaonajwiększychstężeniach
(np.albumina,immunoglobuliny)usuwasięmetodą
chromatografiipowinowactwalubstosujetechnikę
wyrównaniastężeń(ang.equalizer),ultrafiltrację,
wysalanie.
Około10-krotniemniejszazawartośćbiałekniż
wsurowicy.Odzwierciedlazmianydynamiczne
wukładzienerwowym.Trudnodostępnyze
względówpraktycznychietycznych.Stosowane
proceduryanalogicznedoanalizykrwi.
Płynuzyskiwanybezinwazyjnie,odzwierciedla
dynamicznezmianywsurowicy.Wynikiwymagają
normalizacjizwykorzystaniemstężeniakreatyniny.
Niewymagaspecjalnychprzygotowań–najczęściej
wykorzystywanadoanalizynarkotyków.Próbkę
poddajesięekstrakcjiciecz–ciecz,ultrawirowaniu
ioczyszczaniunakolumienkach(SPE).
Bakteriecharakteryzującesięgrubąścianą
komórkową(Gram+)wymagająmechanicznych
metoddezintegracjibądźużyciaodpowiednich
enzymówtrawiennych.Dolizybakteriiocieńszych
ścianachkomórkowych(Gram-)stosujesiębufory
lizujące.
Poprzezwirowaniepróbkiotrzymujesięróżne
frakcjebiałek.Doichrozpuszczeniaihomogenizacji
stosujesięrównieżdetergenty.
