Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
2.Wprzeciwieństwiedopoprzedniejmetody,
LC-MSzajmujesięoznaczaniempolarnychinie-
polarnychzwiązków.Lotnośćitermolabilnośćnie
majątuznaczenia,możnawięcpominąćproces
derywatyzacji.Istniejewieletechnikchromato-
grafiicieczowej,leczobecniewpołączeniachze
spektrometramimaszastosowanieznajdujądwie
techniki
chromatograficzne:
wysokosprawna
(HPLC)iultrawysokosprawna(UHPLC)chro-
matografiacieczowa.UHPLCtolepszaibardziej
zawansowanatechnikachromatografiicieczowej
niżHPLC.Poprzezzastosowaniebardzomałych
wymiarówziarenwkolumnie(1,7pm)orazwyso-
kiegociśnienia(60MPa)możnauzyskaćwiększą
sprawnośćkolumny,większączułość,skrócenie
czasuanalizyorazmniejszezużycieodczynników.
Mimoróżnicobietetechnikisąszerokowykorzy-
stywanewbadaniumetabolitów[10-16].
Najczęściejstosowanąfaząstacjonarnądotego
typubadańjestkolumnazfaząodwróconą(RP,
ang.reversedphase),wktórejdożelukrzemion-
kowegoprzyłączonesąłańcuchyalkiloweC8lub
C18.Przyrozdzieleniubardzopolarnychzwiąz-
ków(np.oligosacharydy)stosujesiękolumny
zwypełnieniemhydrofilowym(HILIC,ang.hy-
drophilicinteractionliquidchromatography)oraz
kolumnychromatograficznewypełnioneniemo-
dyfikowanymżelemkrzemionkowym(NP,ang.
normalphase).Fazaruchomapowinnazawierać
lotnerozpuszczalniki,któreniebędąsięosadzać
wewnętrzuspektrometrumas.Wtymcelustosu-
jesięlotnedodatki,takiejakkwasmrówkowylub
octowy(0,1%),alboichsole-octanamonulmrów-
czanamonu(2-10mmolll).ŹródłojonówLC-MS
mazazadaniewyeliminowaćrozpuszczalnik
zeluentuLCorazwytworzyćjonyfazygazowej
zanalitu.Nowesposobyjonizacjipodciśnieniem
atmosferycznym(API,ang.atmosphericpressure
ionization)zapewniłyrozwiązanietegozadania
idoprowadziłydoprzełomuwsystemachLC-MS
wzakresietechnikanalitycznych.TechnikiAPI
sąnajszerzejstosowanedowykrywaniaiidenty-
fikacjimetabolitów.Główneichzaletytodziałanie
podciśnieniematmosferycznymiwytwarzanie
jonówmolekularnychominimalnejfragmentacji.
DonajpopularniejszychtechnikAPInależą:jo-
nizacjatypuelektrorozpylanie(ESI,ang.electro-
sprayionization),jonizacjachemicznapodciśnie-
niematmosferycznym(APCI,ang.atmospheric
pressurechemicalionization)ijonizacjalaserowa
wspomaganamatrycąpodciśnieniematmosfe-
rycznym(API-MALDI,ang)atmosphericpressure
ionization-matrix-assistedlaserdesorption/ioniza-
tion).Wtechnicetejmożnawykorzystywaćróżne
analizatorymas,takiejakanalizatorczasuprzelo-
tu(TOF),wysokorozdzielczyanalizatormastypu
Orbitraporazpułapkęjonów(IT,ang.iontrap),
leczcorazczęściejzastosowanieznajdująukłady
analizatorówwtandemowychspektrometrach
mas(MSlMS),gdziewystępujądwaanalizatory
ikomorazderzeń.Donajpopularniejszychukła-
dówMSlMSnależą:potrójnykwadrupol(QQQ)
ianalizatorczasuprzelotuwpołączeniuzkwa-
drupolem(Q-TOF)(tab.1.1)[10-16].
Technikąściślezwiązanązchromatografiąjest
równieżelektroforezakapilarna(CE,ang.capillary
electrophoresis).Tostosunkowonowatechnikastoso-
wanadooznaczaniaidentyfikacjiróżnychleków,wtym
antybiotyków.Elektroforezaopierasięnazjawiskach
elektrokinetycznych:elektromigracjijonów,naładowa-
nychcząstekielektroosmozie.Zjawiskatewystępują
wroztworach,gdynaładowanecząstkisąumieszcza-
newpoluelektrycznym,głównieowysokimnapięciu.
Wzależnościodmechanizmuseparacjiwyróżnićmożna
elektroforezęstrefkapilarnych(CZE,ang.capillaryzone
electrophoresis),micelarnąelektrokinetycznąchroma-
tografiękapilarną(MEKC,ang.micellarelectrokinetic
chromatography),elektroforezękapilarnąwukładzie
niewodnym(NACK,ang.non-aqueouscapillaryelec-
trophoresis)orazizotachoforezękapilarną(CITP,ang.
capillaryisotachophoresis).IstotnązaletąCEjestjej
dostępnośćiprostotawyposażenia,atakżezastosowa-
nieniewielkichstężeńrozpuszczalnikóworganicznych
wbuforzeorazprzedewszystkimkrótkiczastrwania
analizyiwysokaskutecznośćseparacjianalitów[17-19].
Większośćproponowanychmetodelektroforetycz-
negorozdzieleniaantybiotykówwróżnychmatrycach
Metodyanalitycznewoznaczaniuiidentyfikacjilekówwpróbkachbiologicznych
7
