Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
Dobadaniametabolizmulekówwygodnymmode-
lemsystemyekspresyjne,doktórychnależą:bakterie,
drożdże,komórkiowadówissaków.Pierwszymimo-
delamikomórkowymi,któreposłużyłydootrzymania
rekombinowanychenzymówcytochromuP450,były
komórkibakteryjne.Późniejzastosowanorównieżko-
mórkidrożdżoweiowadzie.Wadątychsystemówjest
to,żewniecoinnysposóbniżwkomórkachludzkich
przebiegająwnichprocesytranskrypcji,translacjioraz
potranslacyjnamodyfikacjabiałka[48,49].Ponadtopo-
ziompozostałychenzymówmetabolizującychlekijest
innybądźzmieniony.Powszechnymstałosięzatemza-
stosowaniestabilnychliniikomóreknowotworowych.
Najczęściejstosowanymiliniamikomórkowymiotrzy-
manymizludzkichnowotworówsą:liniaHepG2(wy-
prowadzonaznowotworuwątroby)orazCaco-2(zno-
wotworuokrężnicy)[50],którazewzględunaobecność
enzymówmetabolizującychIiIIfazyjestpowszechnie
stosowanawbadaniachprzemianmetabolicznychwielu
lekówiksenobiotyków.Badaniatewymagająpoczątko-
wookreśleniaodpowiednichwarunkówprowadzenia
reakcjipoprzezdobór:liczbykomórek,stężeniabadane-
gozwiązkuorazczasujegoinkubacjizkomórkami[50].
BadaniawpływuekspozycjiwczasiekulturyCaco-2na
testowanezwiązkidowodzą,komórkinabłonkajeli-
towegomogąuaktywniaćprocesyprowadzącedobio-
transformacjileku.Wbadaniachstosujesięspecjalne
naczyniehodowlanezbudowanewformiezamkniętego,
dwukomorowegopojemnika.Międzygórnąadolnąko-
morąjestumieszczonapoziomoporowatamembrana,
naktórejrozwijasiękulturakomóreknabłonkowych.
Zarównogórna(apikalna)komora,jakidolna(pod-
stawna)wypełnionepożywkąhodowlaną.Pożywka
postronieapikalnejmapH6,5,apostroniepodstawnej
7,4,colepiejsymulujewarunkiinvivo.
KomórkiCaco-2produkująenzymy:disacharydazy,
peptydazy,izoenzymyCYP450,transferazę-S-glutatio-
nową,sulfotransferazęiglukuronidazę,atakżebiałka
transportowe,wytwarzaneprzezkomórkiabsorbujące
nabłonka,biorąceudziałwtransporciecukrów,ami-
nokwasów,peptydówiwitamin,orazP-glikoproteinę
ibiałkaopornościwielolekowejzwiązaneztransportem
imetabolizmemleków.Ponadtokomórkitejliniipro-
dukująnaswojejpowierzchniodstronyapikalnejnie-
wielkieilościśluzujelitowego[50].Hodowlekomórek
nabłonkowychprzeprowadzasięwtemperaturze37°C
wspecjalnychinkubatorachzregulowanąatmosferąga-
zów,abyzawierałyone5%CO
2,coimitujestężenietego
gazuwekrwi.Odpowiedniawilgotnośćzabezpiecza
kulturęprzedwysychaniem[50].
1.:
Podsumowanie
Leczeniespersonalizowanetojednoznajważniejszych
osiągnięćwspółczesnejmedycyny.Abydziedzinata
mogłasięrozwijać,niezbędnajestwspółpracaspecja-
listówzobszarubiologii,genetyki,biotechnologii,bio-
informatyki,farmakologiiześrodowiskiemlekarskim.
Prowadzitodoinnowacyjnegopodejściawprofilakty-
ceileczeniupoprzezpolepszeniebądźdostosowanie
terapiifarmakologicznejdoindywidualnychpotrzeb
pacjentów,tzw.celowanaterapiafarmakologiczna,nte-
rapiaszytanamiarę”.
Rozwójtechnikchromatograficznychipołączenie
ichzczułymimetodamidetekcjiumożliwiaoznacza-
nieiidentyfikacjęzwiązkówbiologicznieaktywnych
wpróbkachbiologicznychcelemklinicznegodiagno-
zowaniaschorzeńorazstanówchorobowych.Ponadto
metodatajestwykorzystywanawprzedklinicznych
badaniach
toksyczności
potencjalnych
substancji
leczniczych.Obecnienajbardziejpopularnątechniką
wanalizielekówiichmetabolitówjestwysokosprawna
chromatograacieczowa(HPLClubUHPLC)sprzę-
żonazespektrometriąmas(QQQ,TOF-MS,MALDI).
Połączenietojestnajczęściejstosowanezewzględu
namożliwośćuzyskaniabardzoniskiejgranicywykry-
walności,dobrejselektywności,dokładnościorazpre-
cyzjioznaczeń.
Nacisknarozwójproceduranalitycznychumożli-
wiającychanaliniskocząsteczkowychsubstancjiorga-
nicznychjestcorazwiększy.Dlategoważnymcelemjest
opracowanienowychmetodoznaczaniaiidentyfikacji
dużejliczbyzwiązkówbiologicznieaktywnych,będą-
cychużytecznymnarzędziemdlapotrzebrutynowej
terapiimonitorowanejibadańfarmakokinetycznych.
Uwzględniającpowyższeprzesłanki,prowadzonebada-
18
1.Bioanalitykawtransformacjiinvitroiinvivozwiązkówbiologicznieaktywnychdlapotrzebdiagnostykibiomedycznej