Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
10100KlonowanieDNA
43
-wmiejsceusuniętegojądrakomórkowego9plazmoid9zawierającywklejone
fragmentynicidocelowegogenu9jestwprowadzanydownętrzabakterii
wprocesiezwanymtransformacjązapomocąmetodyzwanejmikroiniekcją
(mikrozastrzykiem);
-bakterie9którepobrałyplazmid9poddajesięrozmnażaniunaszalcezagarem9
otrzymującwielekopiizawartegownichmateriaługenetycznego;bakterie
bezplazmiduginą;
-gdybakteriewyprodukująodpowiedniąilośćbiałka9rozcinasięjeiuwalnia
zawiesinęzichwnętrzadodalszychbadańwzakresie.
•bioinformacji9
•terapiigenowej9
•analizygenowej.
Klonowanegenywprowadzasiędokomórekzwierzątiroślinwprocesie
zwanymtransfekcją9któryprzeprowadzasięnadrodze.
-mikroiniekcji9wktórejklonowanygenjestbezpośredniowstrzykiwanydo
jądrakomórki(wymagatoużyciaspecjalnejaparatury);
-związaniaDNAzfosforanemwapniaiDEAE-dekstranem.
•DNAreagujezchlorkiemwapniawobecnościfosforanu;powstałyosad
dodanydotkanekkomórekzwierzęcychłatwoprzedostajesiędownętrza
przezbłonykomórkowe9
•DEAE-dekstranjestpolimeremkationowym9którywiążesięzujemnie
naładowanymicząsteczkamiDNA9ułatwiaonprzenikanieDNAdownętrza
komórki9
-elektroporacji9polegającejnadodaniuDNAdokulturykomórekipoddaniu
ichkrótkiemudziałaniuprąduelektrycznego;powodujetouszkodzenieściany
komórkowej9umożliwiającwniknięcieDNAdokomórki;wprocesietymjed-
nakwiększośćkomórekginie;
-mikroiniekcjiDNAzkoloidalnymicząsteczkamizłotabezpośredniodo
komórek.
Ilazmidy(wektorymolekularne)sąmałymicząsteczkamiDNAwystępujący-
mimiędzyinnymiwbakteriach.Stanowiądodatekdogłównegochromosomu
bakteryjnego(patrzpodrozdz.1.6).
Bakteryjneenzymyrestrykcyjne(endonukleazy)przecinającząsteczkiDNA
wobrębiespecyficznychsekwencji9zwykle4-8parzasad.Rozpoznawane
przezniesekwencjesąpalindromowe(symetryczne).Oznaczato9żesąone
identycznenaobuniciachczytanychwkierunkuod5Vdo3V.Każdyenzym
rozpoznajespecyficznąsekwencję.
EnzymExoRI9któryotrzymujesięzbakteriiE.coli9rozcinakażdącząsteczkę
DNAzawierającąsekwencjęGAATTCnadwafragmentyzlepkimikońcami.
Cięciedokonywaneprzezenzymrestrykcyjnyzwykleniejestproste.
