Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
1030Metodyoczyszczanfiakwasównuklefinowych
15
-przekazywaniebieżącejinformacjiniezbędnejdosyntezybiałek9charaktery-
stycznychdladanejkomórki9zapomocątRNA;
-przekazywanieinformacjigenetycznejzpokolenianapokolenie(DNA)-
zakażdymrazempotomstwootrzymujepołowęDNAodrodziców.
Kształt9podatnośćnazginanieiskręcaniemakrocząsteczekDNAidynamika
molekularnadecydująoprzebieguważnychbioreakcjiworganizmach.
1030Metodyoczyszczanfiakwasównuklefinowych
DooczyszczaniakwasównukleinowychDNAiRNAzazwyczajstosujesię
kombinacjędwulubwięcejnastępującychtechnik>1.5991.60].
-izolacja/wytrącanie;
-wirowanie(wgradienciechlorkucezu);
-separacjachromatograficzna(patrztomII9rozdz.2).
•filtracjawżelu9
•wymianajonowa9
•selektywnaadsorpcja(chromatografiawykluczania)9
•rozdziałopartynapowinowactwie(affinityseparation).
Izolacjęnajczęściejprzeprowadzasięzapomocąmieszaninychloroformu
ifenoluwceluusunięciazanieczyszczeńbiałkowych.Jeżelistężeniekwasów
nukleinowychjestmałe9dodajesięglikogenwceluzwiększeniaefektywności
wytrącania.
Innymistosowanymimetodamioczyszczaniasą.
-selektywnewytrącaniekwasównukleinowychwwysokichstężeniachsoli
(wysalanie-saltingout);
-zmianapHroztworu;
-użyciedetergentujonowegobromkuheksadecylotrimetyloamoniowego
(CTAB)9którytworzynierozpuszczalnykomplekszkwasaminukleinowymi
wśrodowiskuoniskimzasoleniu;wtychwarunkachzanieczyszczeniapozosta-
jąwroztworze;kompleksDNA-CTABjestrozpuszczalnywroztworzeozwięk-
szonymstężeniusoliiwytrącany70-proc.etanolemlubizopropanolem.
H3
H3
C
C
N
+
CH3
CTAB
Br
–
CH3
UWAGA.CTABjestdrażniącyiżrącydlaoczuiskóry.
