Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
GENETYKAZACHOWANIACZŁOWIEKA:OGÓLNEZAŁOŻENIAIMETODYBADAWCZE
rająceod10do50powtórzeńmotywuodługościod1do6parzasad.Mi-
nisatelity(variablenumbertandemrepeats–VNTR)tozkoleisekwencje
zawierającedokilkudziesięciupowtórzeńmotywuodługościod9do80
parzasad.Przykładowowintronie2genuDRD2zlokalizowanyjestpoli-
morfizmtypuSTR,polegającynawystępowaniuróżnejilościpowtórzeń
sekwencji(CA).Zidentyfikowanowariantymająceod12do17powtórzeń,
przyczymnajczęstszesąallelez13,14i16powtórzeniami(Castiglione
iin.1995).
Doidentyfikacjiwymienionychpolimorfizmówgenetycznychsłużywie-
letechnikgenetykimolekularnej.Poniżejogólnieomówiononajbardziej
podstawoweznich:metodęreakcjiłańcuchowejpolimerazy,elektroforezę
isekwencjonowanie.Ponadtoprzedstawionozałożeniastosowaniatzw.
mikromacierzyDNA–technologiibędącejprzyszłościąanalizgenetycz-
nych.
Metodareakcjiłańcuchowejpolimerazy(polymerasechainreaction
–PCR)pozwalananamnożenieokreślonychodcinkówDNAwdowolnie
potrzebnychilościach.PCRopartajestnaprocesiereplikacjiDNAinvitro.
TypowyschematreakcjiPCRjestszeregiemcyklizłożonychztrzecheta-
pów.Wpierwszymznich,określanymjakodenaturacjaDNA,matrycowa
cząsteczkaDNAulegarozdzieleniunadwienici.Jesttomożliwedzięki
podniesieniutemperaturyroztworu,wktórymznajdujesięDNA,dotem-
peraturyokoło90–95°C.WrezultacieotrzymujemyjednonicioweDNA
(single-strandedDNA–ssDNA),doktóregowdrugimetapiePCR(okre-
ślanymjakoannealing)przyłączająsiękrótkieodcinkiDNA(tzw.primery)
komplementarnedodwóchniciinteresującegonasodcinkaDNAnajego
końcach.Etaptenodbywasięwtemperaturzeokoło40–60°C.Wtrzecim
etapiereakcjiPCR(syntezaDNA)termostabilnyenzympolimerazaDNA,
wykorzystującssDNAorazprzyłączonedoniegoprimery,dosyntezowuje
nukleotydykomplementarnedomatrycy.SyntezaDNAzachodzizwykle
wtemperaturze70–75°C.RezultatemtakiegocykluPCRjestuzyskanie
zjednejwyjściowejcząsteczkiDNAdwóchtakichsamychinteresujących
nasodcinkówDNA.Jakjużwspomniano,cykltakipowtarzasięwielokrot-
nie(poncyklachotrzymujesięteoretycznie2ncząsteczekDNA).Opisa-
nyschematreakcjiPCRmożemiećwspółcześniewielemodyfikacji(por.
McPherson2001).WykonywaniePCRmożliwejestdziękizastosowaniu
specjalnychurządzeńzwanych„termocyklerami”.
Elektroforezakwasównukleinowychjestjednąznajczęściejstosowanych
metodwbadaniachbiologiimolekularnej.Wykorzystujeonawłaściwości
fizycznecząsteczekDNA,które–ponieważmająładunekujemny–wę-
drująwpoluelektrycznym(odkatodydoanody).Prędkośćtejwędrówki
27
