Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
SEKCJAA‒KOMÓRKI
A5Frakcjonowaniekomórek
Hasła
Izolowanie
komórek
iichczęści:
wprowadzenie
Cytometria
przepływowa
Frakcjonowanie
subkomórkowe
Białkamarkerowe
Tematypokrewne
Tkankizwierzątiroślinzbudowanesązkomórek
różnegotypu,awiększośćznichzawierawieleorganelli
wewnątrzkomórkowych.Wceluzbadaniaizolowanych
komórekiorganellipożądanejestuzyskaniehomogennej
populacjiokreślonychkomórek.
Pojedynczekomórkimożnazidentyfikować
przyużyciucytometruprzepływowego.Przeciwciała
sprzężonezfluorescencyjnymibarwnikami,którewiążą
cząsteczkinapowierzchnikomórekokreślonegotypu,
możnazastosowaćdorozdzieleniakomórek
wcytometrzemetodąsortowaniakomórek
aktywowanegofluorescencją(FACS).
Uzyskiwaniefrakcjisubkomórkowych
(wewnątrzkomórkowych)poleganaotwarciukomórki
(np.poprzezhomogenizację)irozdzieleniuróżnych
organelli,zwyklezapomocąwirowania.Wirowanie
różnicowerozdzielaorganellewewnątrzkomórkowe,
bazującnaichzróżnicowanychrozmiarachigęstości.
Ultrawirówkasłużydowytworzeniapotężnychsił
rozdzielającychróżneorganelle,któreosiadająnadnie
probówkiwirówkowej.Przymniejszychsiłachosiadają
jądrakomórkowe,mitochondria,chloroplastyilizosomy,
natomiastwiększesiłysąpotrzebnedoosadzeniabłon
komórkowychorazbłonretikulumendoplazmatycznego
iaparatuGolgiego.Wirowanierównowagowewgradiencie
gęstościwykorzystujegradientroztworuodużejgęstości
(np.roztwórsacharozy)dooddzieleniaorganelli
wewnątrzkomórkowychnapodstawieichgęstości.
Wygodnymsposobemokreśleniaczystościpreparatu
organellijestzmierzeniewróżnychfrakcjach
subkomórkowychaktywnościbiałekmarkerowych
lubenzymatycznych.Białkomarkerowetobiałko,
którewystępujetylkowjednymokreślonymprzedziale
komórki.
(A2)Komórkieukariotyczne
(A4)Obrazowaniekomórek
(C2)Elektroforezażelowa
(C4)Immunodetekcja
(D1)Wprowadzenie
doenzymów
