Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
28
SEKCJAA‒KOMÓRKI
Izolowaniekomórekiichczęści:wprowadzenie
Większośćtkanekzwierzątiroślinzawieramieszaninęróżnychtypówkomórek,
awiększośćkomórekposiadaróżnorodneorganellewewnątrzkomórkowe(patrz
tematA2).Chociażdoobrazowaniaorganelliidużychcząsteczekwewnątrzkomórek
mogąbyćwykorzystaneróżnetechnikimikroskopii(patrztematA4),licznebadania
nadstrukturąifunkcjąkomórkiwymagająpróbkiokreślonegotypukomóreklub
organelliwewnątrzkomórkowych,alboskładnikówwnichzawartych.Większość
procedurbiochemicznychwymagauzyskaniadużejliczbykomórek,anastępniefizycz-
negorozbiciaichwceluwyizolowaniaichskładników.Próbkitkanekczęstodostar-
czająolbrzymieilościmateriału,leczstanowiąheterogennąmieszaninękomórek.
Dlategoopracowanotechniki,zapomocąktórychmożnawyizolowaćhomogenne
(jednorodne)populacjekomórek,namnażaćjewhodowli,anastępniebadaćlub
frakcjonowaćnaposzczególneichczęściskładowe.
Cytometriaprzepływowa
Różnekomórkimożnazidentyfikować,mierzącrozpraszaneprzeznieświatłolub
emitowanąprzezniefluorescencję,gdyprzechodząprzezwiązkęświatłalasera
wcytometrzeprzepływowym.Wwynikuzastosowaniametodysortowania
komórekaktywowanegofluorescencjąokreślanąwskrócieFACS(ang.fluorescen-
ce-activatedcellsorter)(rys.1),wsprzęcieopartymnacytometrzeprzepływowym,
komórkimogązostaćzidentyfikowaneirozdzielone.Badanekomórkisąnajpierw
znakowaneprzeciwciałem,którejestswoistewobecokreślonejcząsteczkiwystępu-
jącejnapowierzchnikomórki.Takieprzeciwciałojestsprzęganezfluorescencyjnym
barwnikiem(patrztematA4)wtakisposób,żemierzonajestfluorescencjakażdej
komórki,gdyposzczególnekomórkipłynącewwąskimstrumieniupojedynczoprze-
chodząprzezwiązkęświatłalasera.Następniezapomocądyszydrgającejtworzone
sądrobnekropelkizwierającepojedynczekomórki,przyczymotrzymująonedodatni
lubujemnyładunekwzależnościodtego,czykomórka,którązawierają,fluoryzuje,
czynie.Zapomocąsilnegopolaelektrycznegoskierowujesięodmiennienaładowane
kropelkidooddzielnychpojemnikówzbiorczych,żeostateczniekażdytakikolektor
zawierahomogenną(jednorodną)populacjękomórekpodwzględemcząsteczki
sprzężonejzprzeciwciałemnaichpowierzchni.Tejednorodnepopulacjekomórek
mogąbyćnastępniewykorzystanewbadaniachbiochemicznychlubutrzymywane
whodowlikomórkowej.ZawartośćDNAlubRNAwkomórcemożnarównieżzmie-
rzyćwcytometrzeprzepływowym.
Frakcjonowaniesubkomórkowe
Wprzeprowadzeniubadańmakrocząsteczeklubprocesówmetabolicznychczęsto
pomagaoddzielenieorganelliwewnątrzkomórkowych(patrztematA2)jednego
rodzajuodpozostałejzawartościkomórki.Stosujesięwtedymetodęfrakcjonowania
subkomórkowego.Napoczątkutrzebarozbićbłonękomórkową(atakżeścianę
komórkową,jeślitawystępuje).Wtymcelutkankęlubpróbkękomórekzawiesza
