Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
A5–Frakcjonowaniekomórek
31
(a)
lizosomy,peroksysomy
fragmentybłonaparatu
mitochondria,
błonakomórkowa,
chloroplasty,
komórkowe
GolgiegoiER
osad
jądra
osad
osad
homogenat
podjednostki
rybosomów
osad
600g,3min
supernatant
6000g,8min
supernatant
40000g,30min
supernatant
100000g,90min
supernatant
cytozol
(b)
wirowanie
supernatant
osad
Rysunek2.Frakcjonowaniesubkomórkowemetodąwirowaniaróżnicowego:
(a)schematfrakcjonowaniapróbkitkanki;(b)wyglądpróbkiwprobówcewirówkowej
przedipowirowaniu
wzrastającagęstość
roztworusacharozy
organelli
wirowanie
frakcja
peroksysomy
mitochondria
lizosomy
Rysunek3.Rozdziałorganelli
metodąwirowaniarównowagowego
wgradienciegęstości
sprawiają,żeorganelleprzemieszczająsiędalejwdółprobówki,alewchodzącdo
obszaruowiększejgęstościniżichgęstość,unosząsięzpowrotemdopoprzedniego
położenia.Mitochondria,lizosomyiperoksysomyróżniąsięgęstościąidlategomogą
byćrozdzieloneprzezwirowaniewgradienciegęstości(rys.3).Podobnie,szorstkie
retulikumendoplazmatyczne,aparatGolgiegoibłonakomórkowamogązostać
rozdzieloneprzyzastosowaniugradientuomniejszejgęstości.Zkoleidorozdzielania
bardziejgęstychcząstek,takichjakDNA,RNAibiałka,technikąwirowaniarówno-
wagowegowgradienciegęstościdoprzygotowaniagradientustosujesięroztwór
chlorkucezuodużejgęstości.
Białkamarkerowe
Gdypróbkakomórekzostaniepoddanafrakcjonowaniu,koniecznejestsprawdzenie
czystościpreparatówróżnychorganelli.Ocenaichmorfologiizapomocąmikroskopii
elektronowejjestjednymzesposobówtakiegosprawdzenia(patrztematA4).Jednak
