Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
C3.Kulturybakteriiwlaboratorium
27
Przechowywanieireaktywacjamikroorganizmów
Bakterieiarcheonysąniezwykleodpornenaskrajnewarunki-wieleznich,nawet
wstaniewegetatywnym,jestwstanieprzetrwaćzamrożenielubwysuszenie,bezszko-
dliwegowpływu.Sprawiato,żedużaczęśćprokariotów-choćwżadnymrazienie
wszystkie-możebyćprzechowywanaprzezdekadyjakozagęszczona(np.wwyniku
wirowania)biomasa.Wwarunkachlaboratoryjnychdługoterminoweprzechowywanie
takiejbiomasypolegaczęstonajejzamrożeniuwtemperaturze-70stopniCelsjusza
w50-procentowymroztworzeglicerolu,choćnależypamiętać,żeczasemprowadzi
todośmiercikomórek.Alternatywąjestmrożeniewroztworzedimetylosulfotlenku
(DMSO),leczwprzeciwieństwiedokomórekeukariotycznychprokariotyrzadko
wymagająprzechowywaniawciekłymazocie.Większelaboratoriastaćnazakup
sprzętudosuszeniapozamrożeniu,czyliliofilizacjihodowlowli.Jesttozdecydowanie
najskuteczniejszametodadługoterminowegoprzechowywaniakomórek.Krótkotermi-
nowe(tj.trwającemaksymalnietydzień)przechowywanienapotrzebylaboratoryjne
polegazregułynaposiewieredukcyjnymbakteriinapodłożustałymznajdującym
sięwodpowiednimnaczyniu(szalcePetriegolub30-mililitrowejbutelce).Okresprze-
chowywaniajestjednocześnieokresemgłodzeniakomórek,którewzwiązkuztym
muszębyćreaktywowanenapodłożuzłożonym,takbyniedoświadczyłyzbytdużego
stresu.
Sterylizacja
Pozakończeniubadaniamikrobiologicznegożywemikroorganizmypowinnybyć
zniszczonewbezpiecznysposób.Podobnieteżprzedrozpoczęciemeksperymentu
inaktywowanepowinnybyćwszystkieżywekomórki,takbywystępowałowyłącznie
pożądaneinokulum.Nastręczatomikrobiologomproblemów,szczególnietym,którzy
pracujązpatogenami,termofilamilubbakteriamiwytwarzającymispory.Wielepospo-
litychpatogenówbakteryjnychatakującychczłowiekazabijaprocespasteryzacji
(poddanieichdziałaniutemperatury71,7stopniaCelsjuszaprzez15sekund),który
niewpływaznacząconapodłożeidlategoteżwykorzystywanyjestwkonserwacji
żywności.Sterylizacjaciepłemwilgotnym,przezwrzącąwodęlubgorącąparę,zabija
większośćkomórekwegetatywnych,jakiniektórewirusy,alenietermofileiendo-
spory.Zkoleiautoklawowanieskażonegosprzętu(działanieprzezponad15minut
temperatury121stopniCelsjusza,osiąganejdziękizastosowaniuciśnieniawyższego
niżciśnienieatmosferyczneo15psi,czyli100kPa)zabijawszystkiekomórkiiwirusy
orazendospory,aleniedasięgozastosowaćdopoliwęglanów(zktórychwykonanych
jestwieleplastikowychpojemników).Ponadtopowodujekarmelizacjęwieluwęglo-
wodanówbędącychskładnikamipodłoża.Dopracyzeskładnikamiwrażliwyminatak
wysokątemperaturęstosujesięnastępującemetody:
•
Tyndalizacja-kilkukrotnepodgrzewaniedotemperatury90-100stopniCelsjusza
przez10minutinastępująceponimschładzanieiinkubacjatrwająca1-2dni.
Procesumożliwiakiełkowanieendosporwpodłożu,alekolejnepodgrzewanie
ostateczniejezabija.
