Treść książki

Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
zsurowicyszczura[10].Wbadaniutymoznaczeniaana-
litycznezostałyprzeprowadzonezzastosowaniemultra-
szybkiejchromatografiicieczowej(UFLC,ang.ultrafast
liquidchromatography)zdetektoremzmatrycąfotodio-
dową(DAD,ang.diodearraydetector).Napodstawieda-
nychliteraturowychorazdostępnejwiedzyjakometodę
przygotowaniapróbekwybranoekstrakcjęciecz-ciecz.
Ztegoteżwzględujakonajistotniejsząwartośćodpowie-
dzianalitycznej(CAA,ang.criticalanalyticalattribute)
wybranoprocentodzyskuoznaczanegoleku.Wykres
rybiejościIshikawyposłużyłdookreśleniazależności
przyczyna-efektmiędzykolejnymiparametramiopra-
cowywanejprocedury,atymsamymnaidentyfikację
potencjalnychźródełodchyleńodoczekiwanejodpo-
wiedzi.Kolejnymetapembyłooszacowaniezmiennych
obarczonychnajwiększymryzykiemoddziaływaniana
CAA.Wtymceluzastosowanopodejściecontrol-noise-
-experimental(CNX).Wyselekcjonowanekrytyczne
zmiennedlametody(CMV,ang.criticalmethodvaria-
ble),wtymprzypadkuczasekstrakcji,szybkośćwirowa-
niaiczaswytrsania,zostałypoddaneoptymalizacji
zwykorzystaniemmetodologiipowierzchniodpowie-
dzi.WybórplanuBBDskutkowałprzeprowadzeniem
jedynie15eksperymentów(ztrzemapowtórzeniami
punktucentralnego),służącychwybraniuoptymalnych
ustawieńwspomnianychparametrów.Uzyskanedane
zostałypoddaneanaliziezwykorzystaniemmetody
wielokrotnejregresjiliniowej(MLR,ang.multiplelinear
regression).Istotnośćstatystycznązbudowanegomodelu
opartonawyznaczonejnapodstawieanalizywariancji
(ANOVA)wartościp,adopasowaniemodeludodanych
-napodstawiewspółczynnikadeterminacjiR2.Dane
zostałytakżepoddanewizualizacjiwpostacimodelu2D
oraztrójwymiarowegomodelupowierzchniodpowiedzi.
Naichpodstawiestwierdzonowystępowanieinterakcji
międzybadanymiczynnikami,cowkońcowymetapie
pozwoliłonawybórichoptymalnychwartości.Opraco-
wanawtensposóbmetodaekstrakcjiciecz-cieczzapew-
niłaodzyskwilazodonunazadowalającympoziomie.
Wedługdanychliteraturowychwykorzystaniepo-
dejściaDoEmożezapewnićtakżeskutecznąoptyma-
lizacjęprocesuekstrakcjisubstancjileczniczejzma-
teriałutkankowego.Wtymceluzastosowanoplan
frakcyjny[11].Podczasbadańwstępnychzweryfikowa-
nowpływczterechczynników(ilośćmetanoluwyko-
rzystanegodohomogenizacjitkanki,temperaturaiczas
ekstrakcjiorazczaswytrząsania)naprocesekstrakcji
lewofloksacynyztkankigruczołukrokowego.Jakoba-
danąodpowiedźwybranostosunekpólpowierzchni
podpikiemuzyskanychdlabadanegolekuistandardu
wewnętrznego(cyprofloksacyny).Poprzeprowadzeniu
etapuprzesiewowegoiwybraniuparametrówwykazu-
jącychistotnystatystyczniewpływnawynikiprocesu,
zostałaprzeprowadzonaoptymalizacjaichwartości
zwykorzystaniemplanuCCD.Natejpodstawieprze-
prowadzono16eksperymentów.Powtarzalnośćbada-
negoprocesuzostałazweryfikowanapoprzezwykona-
nietrzechpowtórzeń(replikacji)punktuśrodkowego.
Badaniaprzeprowadzonozzachowaniemzasadyran-
domizacji,dziękiczemuwyeliminowanoryzykowpły-
wuzmiennychzakłócających.Oznaczeniaanalityczne
prowadzonozwykorzystaniemultrawysokosprawnej
chromatografiicieczowejzdetektoremzmatrycąfoto-
diodową(UHPLC-DAD).Optymalizacjametodychro-
matograficznejrównieżzostałaskutecznieprzeprowa-
dzonazwykorzystaniempodejściaDoE.Minimalną,
koniecznądoprzeprowadzenialiczbęeksperymentów
oszacowanopoprzezzastosowanieplanuBBD.Wyboru
odpowiedzi(rozdzieleniesygnałówlewofloksacynyicy-
profloksacyny,symetriapikuiczasretencjilewofloksa-
cyny)dooptymalizacjidokonanonapodstawiewcześ-
niejszychdoświadczeńiposiadanejwiedzy.Zależność
międzyczynnikamiaodpowiedziamizostałazbadana
zwykorzystaniemmodeluregresjikwadratowej.Opty-
malne(najbardziejkorzystne)wartościbadanychpara-
metrówdobrano,wykorzystującwykresypowierzchni
odpowiedzi,modelepredykcyjneorazfunkcjęmaksy-
malnegodopasowania(DF,ang.desirabilityfunction).
Istotnośćstatystycznąwszystkichzbudowanychmodeli
zbadanozwykorzystaniemanalizywariancji,awspół-
czynnikdeterminacjiposłużyłsprawdzeniudopasowa-
niazbudowanychmodelidodanycheksperymentalnych.
Dodatkowo,zwykorzystaniemplanuPlacketta-Burma-
na,zbadanoelastycznośćopracowanejmetody.Prze-
prowadzenie17eksperymentów,uwzględniającychpięć
powtórzeńpunktucentralnego(czyliwyselekcjonowa-
nychuprzednioustawieńoptymalnych),pozwoliłona
sprawdzeniewpływuniewielkichzmianwustawieniach
Planowaniejakościwpraktycelaboratoryjnej
455