Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
ŹródłaDNA
23
Ryci1i14iGenerowaniekrzywejwzorcowej,zktórązestawiasięproduktyqPCRwceluustalenia,
jakailośćDNAzostaładodanadomieszankiqPCR.Wtymprzypadkukrzywawzorcowabazujena
seriiwzorcowychstężeń,zktórychkażdejest10-krotniewyższeoddrugiego;innymisłowy–na
seriipróbek,wktórychwiemy,ileDNAdonichdodano.(A)Wykresprzedstawiającyuzyskanąilość
produktufluorescencyjnego(ΔRN)wkażdejreakcjiqPCR.Każdaparakrzywych(wsumiejestich
7)oznaczainnestężenieDNA,począwszyod106kopiinareakcję(polewej),askończywszyna100
kopiachnareakcję(poprawej);krzywetesporządzonodwukrotnie.Nailustracjiukazanoteżpróg
kwantyfikacji(ΔRN=0,02141),poniżejktóregopowielonyDNAuważasięzaHszum”,atakżetypową
flourescencjętła(skręconelinieponiżejprogu).(B)KrzywawzorcowaqPCRwygenerowanawtej
samejreakcjico(A).Każdyprostokątodpowiadajednejkrzywej;CTtocyklkwantyfikacji,aHliczba”
toliczbakopiiDNAdlareakcji(dodawanychręczniedoreakcji).PorównującproduktyreakcjiqPCR
onieznanychilościachDNAzkrzywymiwzorcowymi,jesteśmywstanieoszacowaćliczbękopiiDNA
obecnychwdanejpróbce.RycinaautorstwaChariseCurrier
ŹródłaDNA
ZarównoPCR,jakiqPCRwymagająbardzoniewielkiejilościDNAmatrycowego;
oznaczato,żejesteśmywstaniedokonaćcharakterystykigenetycznejosobnikównapod-
stawiebardzowielurodzajówpróbek,którychwiększośćmożnapobraćbezpowodowa-
niatrwałegouszczerbkunazdrowiuorganizmów,zktórychpróbkitepochodzą.Mówiąc
ogólnie,istniejątrzyróżnekategorieDNAwykorzystywanegowekologiimolekularnej.
PierwszyrodzajtoDNAgenomowy,izolowanyalbozcałychorganizmów(naprzykład
mikrobówczymałychbezkręgowców),albozmateriałutakiegojakkrew,włosy,sierść,
liście,korzenieitp.DrugityptoDNAzbiorczy,odnoszącysiędopulifragmentówge-
nomupobranychwtymsamymczasiezwielugatunkówiosobnikówusuniętychzich
siedlisk,naprzykładzgrupymikroorganizmówwpróbcegleby(Creeriin.2016).Trze-
ciakategoriatoeDNA,czylimateriałwyizolowanyzpozostałościDNApochodzących
zpróbkiśrodowiskowej,takiejjakglebalubwoda,bezkoniecznościuprzedniegowyizo-
lowaniaorganizmów(Taberletiin.2012).
JakożedoprzeprowadzeniaPCRpotrzebanaprawdęniewielkichilościDNA,nie
musimyzabijaćzwierząt,bydokonaćcharakterystykigenetycznejosobników.Otoprzy-
kładypróbekwykorzystanychwanalizieDNAipobranychbezzabijaniazwierząt,acza-
semteżpróbekocharakterzezupełnienieinwazyjnym:DNAzkałuwykorzystanydo
opisaniagatunkówtrudnychdoschwytania,takichjakdużekotowate(Mesa-Cruziin.
2016);DNAzkałulubpajęczejniciwykorzystanydoopisaniamałychgatunków,takich
jakpająki,którewprzeciwnymrazienapotrzebypobraniapróbkitrzebabyzabić(Blake
iin.2016,Sintiin.2015);DNAzwymiocin,odchodówlubcałejzawartościżołądka
doopisaniaofiardrapieżników(Kamenovaiin.2018);pióraptaków(Kleveniin.2016);
fragmentyczułkówpszczół(Oiiin.2013);wymazyześluzurybisłodkowodnychmałży
(Choiin.2016,LeViniin.2011);próbkiwłosówpobranezapomocąmetodnieinwa-
zyjnych(Kendalliin.2009).Natematpobieraniapróbekgenetycznychmetodaminie-
inwazyjnymizob.Beja-Pereiraiin.(2009).Pracujączniewielkimipróbkami,należyjed-
nakpostępowaćszczególnieostrożnie,byuniknąćichzanieczyszczenia,ponieważobcy
DNAłatwomożeprzykryćDNA,którynasinteresuje.Cowięcej,mogąsiętakżepoja-
