Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
1.2.Białkaipeptydy
Punktizoelektryczny(pI)dlabiałekwyznaczasięmetodami:
–chromatograficznymi(ogniskowaniechromatograficzne,chromatofocusing),
–elektroforetycznymi(ogniskowanieizoelektryczne,isoelectrofocusing),
–polarymetrycznymi.
1.2.2.Wysalanieidenaturacjabiałek
11
Małestężeniesolinieorganicznych(główniedodaniesiarczanu(VI)amonu,
(NH
4)
2SO
4)sprzyjarozpuszczaniuniektórychbiałekwwodzie.Zezwiększeniemstę-
żeniasolinastępujeuszkodzenieotoczkisolwatacyjnejbiałka,copowodujestrącanie
siębiałkazroztworubeznaruszeniajegostruktury.Procestennazywasięwysala-
niembiałkaijestodwracalny(tylkodlaprostychbiałek)pousunięciusolilubrozcień-
czeniu(renaturacja).Zdolnośćdowysalania,zależnaodpH,jestważnąmetodądo
rozpoznawaniairozdzielaniaposzczególnychaminokwasów.Wwynikuzwiększania
stężeniasiarczanu(VI)amonumożnastrącaćbiałkazichroztworówwodnychwspo-
sóbfrakcyjny[1.8].
Zdolnośćwysalaniasolizależyzarównoodkationu,jakianionubiałka.Zewzględu
nasiłęwysalającąmożnauszeregowaćkationyianionywszeregliotropowy(szereg
Hofmeistera):
aniony:cytrynian>winian>siarczan(VI)>octan
kationy:Th3+>Al3+>Se2+>Sr2+>Cu2+>Mg2+>NH4+>Na+>Li+
Otoczkęsolwatacyjną(dipolewodnenapowierzchnicząsteczkibiałka)można
zmniejszyćpododaniurozpuszczalnikówoniskiejstałejdielektrycznej,takichjak:eta-
nol,aceton,glikoletylenowy.
Strącaniebiałkazachodzinajłatwiejwpunkcieizoelektrycznym(pI).Jeżeliproces
tenbędzieprowadzonypowoliwtemperaturzeod0OCdo-5OC,astężeniesoliirozpusz-
czalnikówbędzierosłowroztworzewolno,touzyskanewosadziebiałkoporozpuszcze-
niuzachowacechycharakterystycznebiałkanatywnego.
Denaturacjabiałekjesttozniszczenieoddziaływańmiędzycząsteczkowychwstruk-
turachdrugo-itrzeciorzędowych,wiążącychmakrocząsteczkibiałekmiędzysobą:
–wiązańwodorowych(-NH...O=),
–oddziaływańjonowych(-NH
3
+-OOC-),
–oddziaływańelektrostatycznych,
–wiązańkowalencyjnychwmostkachdisiarczkowych(-S-S-),
bezuszkodzeniastrukturypierwszorzędowejprzycałkowitymzachowaniustruktury
pojedynczejmakrocząsteczkibiałka.Zamiaststrukturyfibrylarnejmakrocząsteczkibiałka
przybierająpostaćkłębkastatystycznego.
Doczynnikówwywołującychdenaturacjęnależą:
–podwyższonatemperatura(wskutekczegobiałkaniemajątemperaturytopnienia),
–działanierozpuszczalnikóworganicznych,
