Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
14
1.Biopolimery
nybiałek.Powypłukaniukolumnyzniezwiązanychbiałek,białkotworzącekompleks
możebyćwyizolowanezapomocązmianypH,
–elektroforetycznymi,zapomocążeliagarowychipoliakrylamidowych,charakteryzu-
jącychsięwyższąrozdzielczościąniżbibułachromatograficzna.Rozdzielaniebiałek
ikwasównukleinowychprzeprowadzasięwkomorzeelektroforetycznejwpoluelek-
trycznym(rys.1.4).
Rys.1.4.Schematkomoryelektroforetycznej
Warunkielektroforezy:
•pH>pI(uzyskujesięzapomocąbuforówzasadowych),
•sumarycznyładunekelektrycznyposzczególnychbiałekpowinienbyćujemny,
•białkapowinnysięróżnićwielkościamiładunku.
Rozdzielanebiałkaspełniającetewarunkiporuszająsiętylkowjednymkierun-
kudoanodyzprędkościązależnąodmasymolowejiładunkuelektrycznego.
Pozakończeniuelektroforezybiałka:
•elektroforogramutrwalasię(denaturuje)wmieszaniniekwasuoctowegoimetano-
lu,wskutekczegobiałkastająsięnierozpuszczalne,
•następniewybarwiasięutrwalonebiałkabarwnikami(najczęściejsulfonowymi).
Ilośćzwiązanegobarwnikajestproporcjonalnadozawartościbiałkawdanymprąż-
kunaelektroforogramie.Zapomocądensytometrumierzącegointensywnośćzabar-
wieniaposzczególnychpasmmożnaoznaczyćwzględnestężeniebiałekwrozdzielo-
nychfrakcjach.
Rozdziałbiałekmożnatakżeprowadzićzapomocąelektroforezykapilarnej
(patrztomI,podrozdz.7.2.4).
