Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
36
3.BadaniaGenetyCznewCHoRoBaCHmitoCHondRiaLnyCH
AnalizadelecjimtDNA
NajpowszechniejstosowanątechnikąanalizyrozległychdelecjimtDNAjestdłu-
giPCR(longPCR),najlepiejtaki,któryobejmujeswymzakresemcałymito-
chondrialnyDNA.Wtakimprzypadkustarterylokalizujesięwobrębieobszaru
kontrolnego,któryrzadkoulegadelecji.Badaniejestczułe,stosunkowoszybkie
imałopracochłonne,alemajedenpodstawowymankament-jestbadaniemjako-
ściowym,anieilościowym.Podpojęciemrozległadelecja/delecjekryjesięutra-
takilkutysięcyparzasad,cobiorącpoduwagęzwartąkonstrukcjęgenetyczną
mtDNAoznaczaconajmniejkilkagenów,któreniemająswoichjądrowychod-
powiednikówiwszystkiesąniezbędnedożycia.Oznaczato,żewpraktycenie
spotykasięhomoplazmatycznychdelecjimtDNA-zawszeczęśćmateriaługene-
tycznegomaprawidłowądługość.PodczasPCRjednakzwyklepreferencyjniena-
mnażanesąkrótszecząsteczkimtDNA-tezdelecją.Zatemnawetjeślifaktycz-
nypoziomheteroplazmiijestniższy,wwynikubadaniamożemynieobserwować
cząsteczekpełnejdługości(ryc.3.7).Abyokreślićpoziomheteroplazmii,można
zastosowaćPCRwczasierzeczywistymzzastosowaniemdwóchsond-jednej
1
2
3
m
10000bp
3000bp
1000bp
500bp
mtdna
prawidłowej
długościok.16500bp
Rycina3070
analizadługościmtdnaprzeprowadzanametodądługiegopCRzzastosowaniemstarterów
pozwalającychnanamnożeniecałegomtdna.1-jedenprążeknawysokościok.16500bp
oznaczawynikprawidłowy;2-opróczprążkaoprawidłowejwielkości,ok.16500bp,obec-
neliczneprążkiodpowiadającecząsteczkomkrótszym-wynikwskazujenaobecnośćlicznych
rozległychdelecji;3-opróczprążkaoprawidłowejwielkości,ok.16500bp,obecnydodatko-
wyprążekwskazującynaistnieniefrakcjicząsteczekkrótszych,pozbawionychznacznejczęś-
cimtdna,czylipojedynczejrozległejdelecji,m-marker(standard)wielkościdna.Badanie
przeprowadzoneprzezdrmagdalenęKaliszewską.
