Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
technikianalizykwasównukleinowychwkontekściediagnostykimolekularnej…
doobszarunieulegającegodelecjiidrugiejdoobszaru,którywczęścicząsteczek
delecjiuległ.Wzajemnystosuneksygnałówztychdwóchsondpozwoliokreślić
poziomheteroplazmii.Jesttometodadobra,leczdośćtrudnadooptymalizacji.
Wprzypadkupojedynczejdelecjiprzydatnemożebyćtakżeokreśleniejejzakre-
su.MożnatozrobićalbowykorzystującsekwencjonowaniemetodąSangera,albo
NGS(ryc.3.6).
37
AnalizadeplecjimtDNA
LiczbakopiimtDNAwykazujeznacznązmiennośćworganizmieizależyodrodzaju
komórkiorazjejstanuenergetycznego;różnisiętakżepomiędzyosobnikami.Dodat-
kowomożesięzmieniaćwrazzwiekiem,atakżemogąnaniąwpływaćprzyjmowane
leki(np.analoginukleotydów).Wszystkotopowoduje,żewiarygodneokreślenie
liczbykopiiwkontekściepotencjalnejdeplecjiniejestsprawąprostą.Dobadania
wykorzystujesięPCRwczasierzeczywistym,tymrazemstosującsondęwykrywa-
jącąmtDNAorazsondędojakiegośgenujądrowego,któryniewykazujezmienności
liczbykopii(ukażdejosobywystępujepojednymzallelinakażdymzchromoso-
mówhomologicznych).Sygnałzsondyjądrowejodpowiadadwómkopiomgenu
jądrowego-porównującdoniegosygnałsondykomplementarnejdomtDNA,ustala
sięjegoliczbękopii.Abytakiebadaniebyłowiarygodne,koniecznejestokreślenie
prawidłowejliczbykopiidlalicznejgrupykontrolnejwodpowiednimwiekuidla
konkretnejtkanki.DodatkowoznaczeniemametodaizolacjiDNA,gdyżróżneme-
todymogąwróżnymstopniuwybiórczobardziejwydajnieizolowaćmitochondrialny
lubjądrowyDNA,cowkonsekwenc
jimożemiećwpływnauzyskiwanewyniki.
Sprawiato,żeocenaliczbykopiiprzeprowadzanajeststosunkoworzadko.
Analizagenówjądrowych
Wzależnościodrodzajuchoroby,acozatymidzie-jejpodłożamolekularnego,
zarównozakresbadań,jakikonkretnemetodymogąsiębardzoróżnić.Poniżej
zostanąprzedstawioneprzykładowepodejściadiagnostyczne.
Analizapojedynczychgenów
Jeślidanachorobamadobrzezdefiniowanepodłożemolekularne,któreogranicza
siędopatogennychwariantówjednegogenulubkilkugenów,alboteżwarianty
niewielugenówodpowiadajązaznacznączęśćprzypadkówtejchoroby,stosuje
siępodejścieopartenaanaliziepojedynczychgenów.Przykłademdobrzeilustru-
jącymtenprzypadekjestzespółAlpersa-Huttenlocherapowodowanywzasadzie
wyłącznieprzezrecesywnewariantygenuPOLG.Wprzypadkurozpoznaniatej
