Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
2010EnzymysłużącedomanipulacjiDnA
27
(A)PolimerazyDNA
matrycaDNA
matrycaRNA
kopieDNA
(b)Nukleazy
endonukleaza
egzonukleaza
Rys.2.4.Aktywność(A)polimeraz,
(B)nukleazi(C)ligazoraz(D)enzymów
modyfikującychkońce0(A)Aktywność
polimerazyDnAzależnejodDnA
(polewej)ipolimerazyDnAzależnej
odrnA(poprawej).(b)Aktywności
endonukleaziegzonukleaz.(c)zielona
cząsteczkaDnAjestłączonasamazsobą
(polewej)izdrugącząsteczkąDnA
(poprawej).(D)Pokazanajestaktywność
terminalnejdeoksynukleotydylotrans-
ferazy:enzymtendodajenukleotydy
dokońcówdwuniciowejcząsteczkiDnA
cięciawewnętrzne
nukleotydyusuwanezkońców
(C)Ligazy
jednacząsteczkaDNA
(D)Enzymymodykującekońce
dwiecząsteczkiDNA
DnA
3‘
TACCCAACGCAATTC
5‘
ATGG
5‘
3‘
nowyDnA
3‘
TACCCAACGCAATTC
5‘
ATGGGTTG
5‘
3‘
decydowaćzsyntetyzowaniestarteraoodpowiedniejsekwencjinukleotydowej
(rys.2.6B).Możnazatemskopiowaćkrótkispecyficznysegmentznaczniedłuż-
szejcząsteczkimatrycowej,cojestznaczniebardziejwartościoweniżkopiowanie
losowe,którezaszłoby,gdybysyntezaDNAniewymagałastartera.Wagękoniecz-
nościstosowaniasterteramożnabędziewpełnidocenić,zmagającsięzopisem
reakcjiPCRwsekcji2.2.
(A)SyntezaDNAwymagastartera
3‘
polimerazaDNA
5‘
5‘
3‘
starter
nowyDNA
3‘
5‘
braksyntezyDNA
syntezaDNA
(b)Starterdecyduje,któraczęśćcząsteczkiDNAjestkopiowana
5‘
starter
3‘
Rys.2.5.Aktywnośćpolimerazy
DnAzależnejodDnA0nowe
nukleotydysądodawanedokońca3!
rosnącegopolinukleotydu,którego
sekwencjędeterminujesekwencjaDnA
matrycowego.Porównajzprocesem
transkrypcji(syntezyrnAzależnej
odDnA)pokazanymnarys.1.13
Rys.2.6.RolastarterawsyntezieDnA
zależnejodmatrycy0(A)Doinicjacji
syntezynowegopolinukleotyduprzez
polimerazęDnAkoniecznyjeststarter.
(b)sekwencjategooligonukleotydu
determinujepozycję,wktórejprzyłącza
sięondomatrycyDnA,azatemprecyzuje
regionmatrycy,którybędziekopiowany.
GdyużywasiępolimerazyDnAdo
stworzenianowegoDnAinvitro,starter
jestzwyklekrótkimoligonukleotydem
zsyntetyzowanymchemicznie
